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| 销售商： 上海研生实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品概述：
| 产品名称 | 人美丽线虫凋亡基因(CED-3)ELISA试剂盒 | 英文名称 | CED-3 Elisa Kit |
| 规格 | 48T/96T | 货号 | Y-E235 |
| 保存 | 2-8℃ | 用途 | 仅供科研 |
🧪 检测原理
试剂盒通常采用双抗体夹心法原理：
包被：酶标板微孔中已预先包被了抗人CED-3（或Caspase-3）的特异性抗体（捕获抗体）。
结合：向微孔中加入待测样本（如细胞裂解液、组织匀浆、血清/血浆）或标准品。样本中的CED-3蛋白会与固相抗体结合。
检测：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体（或生物素-亲和素系统），形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色：加入TMB底物液，HRP催化底物产生蓝色显色反应。
终止与读数：加入终止液（通常为硫酸）使反应终止，溶液颜色由蓝色转变为黄色。在酶标仪450nm波长处测定吸光度（OD值）。OD值的大小与样本中CED-3的浓度呈正相关。
标准操作流程 (SOP)
1. 实验前准备
试剂平衡：从冰箱取出试剂盒，在室温（20-25℃）下平衡30分钟。
配液：将浓缩洗涤液（如20×或30×）用蒸馏水稀释至1×工作浓度。
标准品复溶：将冻干标准品按说明书要求复溶并进行梯度稀释（如0、150、300、600、1200、2400 μg/mL或其他浓度单位）。
2. 加样
设置孔位：设置空白孔（调零用）、标准品孔（不同浓度梯度）、样本孔。
加样操作：每孔加入50-100μL标准品或待测样本。
温育与洗涤
温育：用封板膜封住板孔，37℃恒温箱温育1-2小时（具体时间依说明书而定）。
洗涤：弃去孔内液体，甩干，每孔注满洗涤液，静置1分钟后弃去，拍干。重复此过程3-5次。
4. 加酶标试剂
加酶：除空白孔外，每孔加入酶标试剂（HRP标记抗体）50-100μL。
温育：37℃避光温育1小时。
洗涤：再次洗板3-5次，拍干。
5. 显色与终止
显色：每孔加入显色剂A液和B液各50μL，37℃避光显色15-30分钟。
终止：每孔加入50μL终止液，此时溶液颜色由蓝变黄。
读数与计算
测定：以空白孔调零，在450nm波长下测定各孔OD值（需在加终止液后15分钟内完成）。
计算：
以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
根据样本OD值在标准曲线上查出对应浓度。
若样本经过稀释，需乘以稀释倍数。"
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