
细胞简介:
作为哺乳动物的器官,不仅是 T细胞分化、发育、成熟,同时向外周T细胞库输出T细胞的场所。的结构表面有结缔组织被摸,结缔组织伸入实质把分成许多不分隔的小叶。其中,结缔组织是由成纤维细胞构成,对中的其他细胞起到保护和支持作用。
细胞传代流程
1. 观察与吸液 弃去旧培养基,用PBS缓冲液轻轻洗涤1-2次,去除残留血清。 血清会抑制胰酶活性,清洗步骤很重要。
2. 消化 加入适量预热的胰酶(如0.25% Trypsin-EDTA),覆盖瓶底即可。 EDTA 可以螯合钙镁离子,辅助消化。
3. 孵育与观察 放入37℃培养箱,显微镜下观察。待细胞变圆、间隙增大、轻拍瓶壁细胞脱落时,立即终止。 切勿消化过度,否则细胞膜受损,细胞会死。
4. 终止消化 迅速加入含血清的完全培养基,轻轻吹打混匀。血清能抑制胰酶活性。 吹打要轻柔,避免产生气泡损伤细胞。
5. 离心 将细胞悬液转移至离心管,1000 rpm(约120×g)离心3-5分钟。 离心是为了去除胰酶和死细胞碎片。
6. 重悬与分瓶 弃上清,加入新鲜完全培养基重悬细胞,按比例(如1:2, 1:3)接种到新瓶。
细胞的(冻存与复苏):
为了保证细胞的遗传稳定性,避免因传代过多而老化或变异,我们需要对细胞进行长期保存。
冻存(慢冻):
使用含有DMSO(二甲基亚砜)和血清的冻存液。DMSO能防止细胞内结冰。标准流程通常是:4℃平衡 -> -80℃梯度降温 -> 转入液氮(-196℃)长期保存。
复苏(快融):
从液氮中取出冻存管后,必须立即放入37℃水浴中快速融化。研究表明,缓慢解冻会导致冰晶重结晶,从而刺破细胞膜,导致细胞死亡。
避坑指南(关键技巧)
为了让你少走弯路,我总结了几个容易被忽视的细节:
防止污染:如果担心组织本身带有微生物,可以在清洗时用含双抗的溶液浸泡30分钟,或者在培养基中加入高浓度抗生素预培养24小时,之后再换正常培养基。
血清的作用:原代细胞培养通常需要更高比例的胎牛血清(如15%-20%),以提供更多的生长因子来支持细胞适应新环境。
成纤维细胞的干扰:很多组织(如肿瘤、皮肤)原代培养时,生长快的成纤维细胞往往会盖过上皮细胞。如果需要纯化上皮细胞,可能需要通过刮除法或差速贴壁法来去除成纤维细胞。
消化温度:胰酶在低温下活性低,操作时尽量保持试剂在冰上,只有消化时才放入37℃,以减少对细胞的非特异性损伤。
公司正在出售的产品:
| [γ32P]ATP激酶标记试剂盒 |
口蹄疫病毒VP1抗体 |
| 细胞半胱-10(CASPASE-10)活性荧光定量检测试剂盒 |
TBC结构域的蛋白激酶样蛋白抗体 |
| 细胞B-RAF激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
G蛋白偶联受体137抗体 |
| 奶制品乳果糖(lactulose)含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒 |
丝氨酸消旋酶抗体 |
| 组织科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定性检测试剂盒 |
DNA聚合酶κ/DNA pol κ抗体 |
| 细菌冻存培养基 |
人体RASSF1A基因甲基化检测试剂盒 |
| 环指蛋白HCG1抗体 |
细胞CASPASE-8蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 |
| Pacific Blue标记人CD127 (IL7R)单克隆抗体 |
P38蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 |
| 富含亮氨酸重复蛋白8B抗体 |
组织蛋白磷酸酶2A (PP2A)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒 |
| 肿瘤/睾丸抗原112抗体 |
猪胸腺基质细胞冰冻切片核酸氧化(8-Hydroxyguanine)免疫染色测定试剂盒 |
| 血管紧张素激活蛋白1抗体 |
基因靶标技术试剂盒 |
| 3-磷酸甘油醛脱氢酶(内参)单克隆抗体 |
缺氧诱导因子1α抑制蛋白/HIF1AN单克隆抗体 |
注意事项:
● 无菌操作:自取材开始,保持所有组织细胞处于无菌条件,严格进行皮肤消毒和器械消毒,防止细菌、霉菌、支原体污染。
● 培养液与试剂:使用新鲜配制的消化酶溶液,注意培养液中营养成分的补充,如谷氨酰胺等,选择合适的胎牛血清。
● 培养条件:原代细胞在消化分离后,置于CO₂培养箱的头24-48h内,应处于绝对静置状态,避免频繁观察影响细胞贴壁。