
细胞简介:
卵巢是雌性动物的生殖器官。卵巢的功能是产生卵以及类固醇。它的外表有一层上皮组织,其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分,主要由卵泡和结缔组织构成;髓质位于中央,由疏松结缔组织构成,其中有许多血管、管和神经。
卵巢是分泌雌的主要器官。卵巢分泌的雌主要是雌二醇。卵巢中颗粒细胞是合成雌的场所。其产生过程是使雄烯二酮转变成雌:内膜细胞在 LH的作用下,使胆固醇转变为雄烯二酮;颗粒细胞在FSH的作用,发育过程中产生芳香化酶,它使雄烯二酮转变成雌。形成的雌分泌到卵泡液和血液中。
细胞传代流程
1. 观察与吸液 弃去旧培养基,用PBS缓冲液轻轻洗涤1-2次,去除残留血清。 血清会抑制胰酶活性,清洗步骤很重要。
2. 消化 加入适量预热的胰酶(如0.25% Trypsin-EDTA),覆盖瓶底即可。 EDTA 可以螯合钙镁离子,辅助消化。
3. 孵育与观察 放入37℃培养箱,显微镜下观察。待细胞变圆、间隙增大、轻拍瓶壁细胞脱落时,立即终止。 切勿消化过度,否则细胞膜受损,细胞会死。
4. 终止消化 迅速加入含血清的完全培养基,轻轻吹打混匀。血清能抑制胰酶活性。 吹打要轻柔,避免产生气泡损伤细胞。
5. 离心 将细胞悬液转移至离心管,1000 rpm(约120×g)离心3-5分钟。 离心是为了去除胰酶和死细胞碎片。
6. 重悬与分瓶 弃上清,加入新鲜完全培养基重悬细胞,按比例(如1:2, 1:3)接种到新瓶。
细胞的(冻存与复苏):
为了保证细胞的遗传稳定性,避免因传代过多而老化或变异,我们需要对细胞进行长期保存。
冻存(慢冻):
使用含有DMSO(二甲基亚砜)和血清的冻存液。DMSO能防止细胞内结冰。标准流程通常是:4℃平衡 -> -80℃梯度降温 -> 转入液氮(-196℃)长期保存。
复苏(快融):
从液氮中取出冻存管后,必须立即放入37℃水浴中快速融化。研究表明,缓慢解冻会导致冰晶重结晶,从而刺破细胞膜,导致细胞死亡。
避坑指南(关键技巧)
为了让你少走弯路,我总结了几个容易被忽视的细节:
防止污染:如果担心组织本身带有微生物,可以在清洗时用含双抗的溶液浸泡30分钟,或者在培养基中加入高浓度抗生素预培养24小时,之后再换正常培养基。
血清的作用:原代细胞培养通常需要更高比例的胎牛血清(如15%-20%),以提供更多的生长因子来支持细胞适应新环境。
成纤维细胞的干扰:很多组织(如肿瘤、皮肤)原代培养时,生长快的成纤维细胞往往会盖过上皮细胞。如果需要纯化上皮细胞,可能需要通过刮除法或差速贴壁法来去除成纤维细胞。
消化温度:胰酶在低温下活性低,操作时尽量保持试剂在冰上,只有消化时才放入37℃,以减少对细胞的非特异性损伤。
公司正在出售的产品:
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ATRNL1蛋白抗体 |
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铁氧化还原蛋白还原酶抗体 |
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离子通道蛋白Kv3.3抗体 |
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冰冻切片组织L(CATHEPSIN L)活性原位荧光染色检测试剂盒 |
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活性高效液相色谱法(HPLC)定量检测试剂盒 |
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猪卵巢颗粒细胞冰冻切片组织RyR受体蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
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RhoC鸟苷酸酶活性分析试剂盒 |
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真菌天青曙红(Azure-eosinate)染色试剂盒 |
注意事项:
● 无菌操作:自取材开始,保持所有组织细胞处于无菌条件,严格进行皮肤消毒和器械消毒,防止细菌、霉菌、支原体污染。
● 培养液与试剂:使用新鲜配制的消化酶溶液,注意培养液中营养成分的补充,如谷氨酰胺等,选择合适的胎牛血清。
● 培养条件:原代细胞在消化分离后,置于CO₂培养箱的头24-48h内,应处于绝对静置状态,避免频繁观察影响细胞贴壁。