
细胞简介:
鼻腔粘膜是覆盖在动物体内呼吸器官管腔内壁的一层组织结构,由上皮组织和疏松结缔组织构成。鼻腔粘膜覆盖于鼻腔表面,粘膜下方为软骨、骨或骨骼肌。
上皮的垂直切面上,细胞形状不一。紧靠基膜的一层基底细胞为矮柱状,为具有增殖分化能力的干细胞,部分子细胞向浅层移动。基底层以上是数层多边形细胞,再上为几层梭形或扁平细胞。仅靠近表面几层细胞为扁平状,基底层细胞能不断分裂增生,以补充表层衰老或损伤脱落的细胞。复层扁平上皮深层的结缔组织内有丰富的,有利于复层扁平上皮的营养
细胞传代流程
1. 观察与吸液 弃去旧培养基,用PBS缓冲液轻轻洗涤1-2次,去除残留血清。 血清会抑制胰酶活性,清洗步骤很重要。
2. 消化 加入适量预热的胰酶(如0.25% Trypsin-EDTA),覆盖瓶底即可。 EDTA 可以螯合钙镁离子,辅助消化。
3. 孵育与观察 放入37℃培养箱,显微镜下观察。待细胞变圆、间隙增大、轻拍瓶壁细胞脱落时,立即终止。 切勿消化过度,否则细胞膜受损,细胞会死。
4. 终止消化 迅速加入含血清的完全培养基,轻轻吹打混匀。血清能抑制胰酶活性。 吹打要轻柔,避免产生气泡损伤细胞。
5. 离心 将细胞悬液转移至离心管,1000 rpm(约120×g)离心3-5分钟。 离心是为了去除胰酶和死细胞碎片。
6. 重悬与分瓶 弃上清,加入新鲜完全培养基重悬细胞,按比例(如1:2, 1:3)接种到新瓶。
细胞的(冻存与复苏):
为了保证细胞的遗传稳定性,避免因传代过多而老化或变异,我们需要对细胞进行长期保存。
冻存(慢冻):
使用含有DMSO(二甲基亚砜)和血清的冻存液。DMSO能防止细胞内结冰。标准流程通常是:4℃平衡 -> -80℃梯度降温 -> 转入液氮(-196℃)长期保存。
复苏(快融):
从液氮中取出冻存管后,必须立即放入37℃水浴中快速融化。研究表明,缓慢解冻会导致冰晶重结晶,从而刺破细胞膜,导致细胞死亡。
避坑指南(关键技巧)
为了让你少走弯路,我总结了几个容易被忽视的细节:
防止污染:如果担心组织本身带有微生物,可以在清洗时用含双抗的溶液浸泡30分钟,或者在培养基中加入高浓度抗生素预培养24小时,之后再换正常培养基。
血清的作用:原代细胞培养通常需要更高比例的胎牛血清(如15%-20%),以提供更多的生长因子来支持细胞适应新环境。
成纤维细胞的干扰:很多组织(如肿瘤、皮肤)原代培养时,生长快的成纤维细胞往往会盖过上皮细胞。如果需要纯化上皮细胞,可能需要通过刮除法或差速贴壁法来去除成纤维细胞。
消化温度:胰酶在低温下活性低,操作时尽量保持试剂在冰上,只有消化时才放入37℃,以减少对细胞的非特异性损伤。
公司正在出售的产品:
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跨膜蛋白132D抗体 |
| 组织半胱-5(CASPASE-5)活性荧光定量检测试剂盒 |
TIGD1蛋白抗体 |
| 组织CDK2/CYCLIN E激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
G蛋白偶联受体174抗体 |
| 总巯基含量比色法定量检测试剂盒 |
丝裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗体 |
| 细胞HHV6-B(HUMAN HERPESVIRUS 6-B)病毒 |
DNA糖基化酶FPG2抗体 |
| 细菌苯胺黑负性染色试剂盒 |
DNA甲基转移酶-3A(DNMT-3A)活性酶连续循环比色法 |
| 活化B淋巴细胞因子1抗体 |
冰冻切片组织CASPASE-6蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
| Pacific Blue标记小鼠CD19单克隆抗体 |
石蜡切片组织PDGF-B蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
| 富含亮氨酸重复神经元3抗体 |
组织磷酸葡萄糖酸脱氢酶(phosphogluconate dehydrogenase;PGD)活性比色法定量检测试剂盒 |
| 肿瘤/睾丸抗原77抗体 |
猪鼻腔粘膜上皮细胞冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒(过氧亚硝基阴离子) |
| 血管内皮锌指蛋白1抗体 |
3’末端RNA探针同位素([α32P]dATP)聚合酶标记试剂盒 |
| 4号染色体开放阅读框29抗体 |
人k轻链重组兔单克隆抗体 |
注意事项:
● 无菌操作:自取材开始,保持所有组织细胞处于无菌条件,严格进行皮肤消毒和器械消毒,防止细菌、霉菌、支原体污染。
● 培养液与试剂:使用新鲜配制的消化酶溶液,注意培养液中营养成分的补充,如谷氨酰胺等,选择合适的胎牛血清。
● 培养条件:原代细胞在消化分离后,置于CO₂培养箱的头24-48h内,应处于绝对静置状态,避免频繁观察影响细胞贴壁。