
1)组织来源于实验动物的正常眼组织。
2)细胞鉴定:波形蛋白(Vimentin)荧光染色为阳性。。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。
我们推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。
1. 细胞复苏
原理 快速解冻减少冰晶损伤,保护细胞膜完整性。
步骤 冻存管→37℃水浴(1-2分钟)→移入预热培养基(5-6ml)→离心(1000rpm, 5分钟)→弃上清,重悬接种→次日换液。
2. 细胞传代
原理 胰蛋白酶消化细胞间及细胞与基质间的连接蛋白,使贴壁细胞脱落。
步骤
培养基预热(37℃)。
吸除旧培养基,PBS轻柔润洗。
加1ml 0.25%胰蛋白酶-EDTA,37℃孵育1-2分钟(显微镜下观察细胞间隙变大、细胞变圆时停止)。
加3-4ml完全培养基终止消化,轻吹打瓶壁使细胞脱落。
离心(1000-1200rpm, 3-5分钟)→弃上清,重悬接种(比例1:2至1:4)。
3. 细胞冻存
原理低温(-80℃至液氮)使细胞代谢停止,长期保存。
步骤
消化并离心收集细胞,弃上清。
加预冷冻存液(90% FBS + 10% DMSO或92% FBS + 8% DMSO),轻轻吹打均匀,细胞浓度约2-3×10⁶ cells/ml。
转移至冻存管,标记清楚。
程序冻存冻存管放入程序冻存盒,-80℃过夜,次日转入液氮长期保存。
无程序冻存盒时 冻存管先4℃静置5-10分钟,再-20℃静置2小时,最后-80℃过夜,次日入液氮。
细胞培养的核心:
无菌环境:这是首要条件。实验室通常使用超净工作台,通过过滤空气去除微生物。任何细菌、真菌或支原体的污染都可能迅速杀死培养的细胞。
营养大餐(培养基):这是细胞的“食物”。通常由基础培养基(如DMEM、RPMI-1640)加上血清(通常为胎牛血清,提供生长因子)组成。
模拟体内环境:
温度:哺乳动物细胞通常在 37°C(人体体温)下培养。
气体:需要 5%的二氧化碳 来维持培养液的pH值,以及氧气供细胞代谢。
公司正在出售的产品:
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细胞分选与检测(流式细胞术):
核心原理:
利用荧光标记的抗体去“识别”细胞表面的特定抗原。细胞在液体中单个排列,通过激光束时,仪器会根据荧光信号将细胞分到不同的收集管中。
关键步骤:
制备单细胞悬液:必须把组织打散成单个细胞。
抗体标记:给细胞“穿上”荧光抗体。
上机调试:调节电压和补偿,确保信号准确。
应用: 检测细胞周期、细胞凋亡、细胞表面标志物分析等。