
细胞简介:
前列腺位于膀胱颈下方,包绕着膀胱口与尿道结合部位。
前列腺腺体主要由 3种细胞构成,即分泌细胞、基底细胞和神经细胞。基底细胞约占前列腺细胞总数的10%,不具有分泌功能,被认为是前列腺的多潜能干细胞。
前列腺基底细胞是前列腺固有腺体中在分泌上皮和基底膜之间单层排列的一层细胞,核小,缺乏胞质。
细胞传代流程
1. 观察与吸液 弃去旧培养基,用PBS缓冲液轻轻洗涤1-2次,去除残留血清。 血清会抑制胰酶活性,清洗步骤很重要。
2. 消化 加入适量预热的胰酶(如0.25% Trypsin-EDTA),覆盖瓶底即可。 EDTA 可以螯合钙镁离子,辅助消化。
3. 孵育与观察 放入37℃培养箱,显微镜下观察。待细胞变圆、间隙增大、轻拍瓶壁细胞脱落时,立即终止。 切勿消化过度,否则细胞膜受损,细胞会死。
4. 终止消化 迅速加入含血清的完全培养基,轻轻吹打混匀。血清能抑制胰酶活性。 吹打要轻柔,避免产生气泡损伤细胞。
5. 离心 将细胞悬液转移至离心管,1000 rpm(约120×g)离心3-5分钟。 离心是为了去除胰酶和死细胞碎片。
6. 重悬与分瓶 弃上清,加入新鲜完全培养基重悬细胞,按比例(如1:2, 1:3)接种到新瓶。
细胞的(冻存与复苏):
为了保证细胞的遗传稳定性,避免因传代过多而老化或变异,我们需要对细胞进行长期保存。
冻存(慢冻):
使用含有DMSO(二甲基亚砜)和血清的冻存液。DMSO能防止细胞内结冰。标准流程通常是:4℃平衡 -> -80℃梯度降温 -> 转入液氮(-196℃)长期保存。
复苏(快融):
从液氮中取出冻存管后,必须立即放入37℃水浴中快速融化。研究表明,缓慢解冻会导致冰晶重结晶,从而刺破细胞膜,导致细胞死亡。
避坑指南(关键技巧)
为了让你少走弯路,我总结了几个容易被忽视的细节:
防止污染:如果担心组织本身带有微生物,可以在清洗时用含双抗的溶液浸泡30分钟,或者在培养基中加入高浓度抗生素预培养24小时,之后再换正常培养基。
血清的作用:原代细胞培养通常需要更高比例的胎牛血清(如15%-20%),以提供更多的生长因子来支持细胞适应新环境。
成纤维细胞的干扰:很多组织(如肿瘤、皮肤)原代培养时,生长快的成纤维细胞往往会盖过上皮细胞。如果需要纯化上皮细胞,可能需要通过刮除法或差速贴壁法来去除成纤维细胞。
消化温度:胰酶在低温下活性低,操作时尽量保持试剂在冰上,只有消化时才放入37℃,以减少对细胞的非特异性损伤。
公司正在出售的产品:
| 肿瘤检测试剂专题 |
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小鼠前列腺基底细胞植物组织线粒体超氧化物歧化酶(Mn/Fe SOD)分离试剂盒 |
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(cetyldimethylethammonium bromide) |
| 5'肌苷磷酸脱氢酶2抗体 |
神经生长因子β单克隆抗体 |
注意事项:
● 无菌操作:自取材开始,保持所有组织细胞处于无菌条件,严格进行皮肤消毒和器械消毒,防止细菌、霉菌、支原体污染。
● 培养液与试剂:使用新鲜配制的消化酶溶液,注意培养液中营养成分的补充,如谷氨酰胺等,选择合适的胎牛血清。
● 培养条件:原代细胞在消化分离后,置于CO₂培养箱的头24-48h内,应处于绝对静置状态,避免频繁观察影响细胞贴壁。