
细胞简介:
股动脉是下肢动脉的主干,由髂外动脉延续而来。在腹股沟韧带中点的深面入股三角。在股三角内,股动脉先位于股静脉的外侧,逐渐从外侧跨到股静脉的前方,下行入收肌管,再穿收肌腱裂孔至腘窝,易名腘动脉。股动脉在腹股沟中点处位置表浅,可摸到搏动,是临床上急救压迫止血和进行穿刺的部位。
动脉发生的一个主要因素是由于血管平滑肌细胞转变成为了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌细胞能表达钙离子通道, ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表达可能是造成血管壁炎症反应,并进一步造成血管的原因 。
因此,对动脉血管平滑肌细胞的体外培养和研究可用来发现和确定新的血管的靶向方法。
细胞特性:
1)组织来源于实验动物的正常股动脉组织。
2)细胞鉴定:平滑肌肌动蛋白(α-SMA)荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。
我们推荐使用 DELF原代平滑肌细胞培养体系 作为该细胞的培养基。
操作步骤:
● 取材:严格进行动物皮肤消毒,使用无菌器械取材,将组织从机体取出后,用Hank’s液洗涤三次,并剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物。
● 分离:根据组织类型选择合适的酶(如胰蛋白酶、胶原酶等)或机械方法将组织分散成单个细胞。
● 计数与接种:用血球计数板对细胞进行计数,将细胞调整到合适的密度(如5×10⁵/ml左右),转移至培养瓶中进行培养。
● 培养:置于合适的培养容器中,在无菌、适当温度(一般为37℃)和一定条件(如5%CO₂)下,使之生存、生长和繁殖。
细胞纯化方法
● 机械分离法:利用物理方法(如切割、刮除)分离目标细胞,适用于组织块较大、细胞分布不均的情况。
● 酶消化法:使用胰蛋白酶、胶原酶等酶类消化组织,广泛用于贴壁细胞、纤维化组织、肿瘤组织等的分离。
● 差速贴壁分离法:利用不同种类细胞贴壁速度差异性,通过控制培养时间差或消化时间差,选择性移除未贴壁或弱贴壁的细胞。
● 化学试剂抑制法:利用某些化学物质对特定细胞生长的抑制作用,如阿糖胞苷可抑制成纤维细胞生长,从而获得纯度较高的目标细胞。
● 密度梯度离心法:利用不同细胞类型的密度差异,通过离心分层,适用于血液细胞等单细胞悬液的分离。
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注意事项:
无菌操作:实验过程中需严格遵循无菌操作规范
消化时间:消化时间不宜过长,以免细胞损伤
培养基更换:每隔3天换液一次,避免培养基污染
细胞鉴定:通过显微镜观察细胞形态,确保实验结果的准确性