1)组织来源于实验动物的正常外周血组织。
2)细胞鉴定:MO-1或MO-2荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式:圆形细胞,不规则细胞,贴壁培养。
我们推荐使用 DELF原代 巨噬 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。
操作步骤:
● 取材:严格进行动物皮肤消毒,使用无菌器械取材,将组织从机体取出后,用Hank’s液洗涤三次,并剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物。
● 分离:根据组织类型选择合适的酶(如胰蛋白酶、胶原酶等)或机械方法将组织分散成单个细胞。
● 计数与接种:用血球计数板对细胞进行计数,将细胞调整到合适的密度(如5×10⁵/ml左右),转移至培养瓶中进行培养。
● 培养:置于合适的培养容器中,在无菌、适当温度(一般为37℃)和一定条件(如5%CO₂)下,使之生存、生长和繁殖。
细胞纯化方法
● 机械分离法:利用物理方法(如切割、刮除)分离目标细胞,适用于组织块较大、细胞分布不均的情况。
● 酶消化法:使用胰蛋白酶、胶原酶等酶类消化组织,广泛用于贴壁细胞、纤维化组织、肿瘤组织等的分离。
● 差速贴壁分离法:利用不同种类细胞贴壁速度差异性,通过控制培养时间差或消化时间差,选择性移除未贴壁或弱贴壁的细胞。
● 化学试剂抑制法:利用某些化学物质对特定细胞生长的抑制作用,如阿糖胞苷可抑制成纤维细胞生长,从而获得纯度较高的目标细胞。
● 密度梯度离心法:利用不同细胞类型的密度差异,通过离心分层,适用于血液细胞等单细胞悬液的分离。
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注意事项:
无菌操作:实验过程中需严格遵循无菌操作规范
消化时间:消化时间不宜过长,以免细胞损伤
培养基更换:每隔3天换液一次,避免培养基污染
细胞鉴定:通过显微镜观察细胞形态,确保实验结果的准确性