实验原理:

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被BP180-Ab 人抗BP180抗体抗体功能相关抗原3反应蛋白捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的BP180-Ab 人抗BP180抗体抗体功能相关抗原3反应蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品含量。
中文名称:
BP180-Ab 人抗BP180抗体ELISA检测试剂盒
产品规格:48孔/盒 96孔/盒
检测方法:酶联免疫法
检测时间:2-3H
独特优势:灵敏度高、特异性强、重复性好
订购试剂盒可免费代测,收到样本7个工作日出结果,具体可以咨询我司客服人员。
用 途 :科研实验专用,不得用于临床诊断。
存 储 :2~8℃保鲜冷藏,切勿冷冻
保质期 :6个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
样本处理及要求:

1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
5. 其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
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操作步骤:

1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。样本不足,或者样本浓度过高,可用样本稀释液做稀释。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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