主要功能:
神经调节:参与痛觉传递、情绪调节(如焦虑、抑郁)、学习记忆及神经保护。
内分泌调节:抑制胰岛素分泌,调节摄食行为(特别是对脂肪的摄取)。
其他:参与肿瘤生长调节、炎症反应及生殖系统功能调节。
研究意义:GAL水平的异常与阿尔茨海默病、帕金森病、癫痫、糖尿病及抑郁症等多种疾病密切相关。
该试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)原理。
检测原理:
包被:微孔板上预包被了抗人GAL的特异性抗体。
孵育:加入标准品或待测样本,样本中的GAL与包被抗体结合。
检测:加入生物素标记的检测抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色:加入底物TMB,酶催化底物显色(蓝色),最后加入终止液(通常为硫酸),颜色变为黄色。
计算:颜色的深浅与样本中GAL的浓度成正比。使用酶标仪在450nm波长处测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算出样本浓度。
详细性能与规格
检测方法双抗体夹心法 ELISA
检测范围通常为 15.63 - 1000 pg/mL
灵敏度最低检测限通常 9.38 pg/mL
样本类型血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清、组织匀浆、脑脊液
检测时间约 2.5 - 3.5 小时
保存条件2-8℃冷藏保存(部分组分如浓缩洗涤液需特殊处理)
有效期6 个月
适用样本处理要点.
为了保证数据的准确性,样本处理非常关键:
血清:
使用不含热原和内毒素的试管收集血液。
室温静置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清检测。
血浆:
需使用抗凝剂(EDTA、柠檬酸盐或肝素)。
采集后30分钟内,于2-8℃离心取上清。
组织/细胞:
组织匀浆:用预冷的PBS冲洗组织,称重后剪碎,按1:9比例加入PBS进行研磨,再离心取上清。
细胞上清:离心去除细胞碎片后取上清。
保存:
若不立即检测,建议分装后保存于 -20℃。
严禁反复冻融,以免蛋白降解。
关键操作注意事项.
试剂平衡:试剂盒从冰箱(2-8℃)取出后,必须在室温下平衡 15-30 分钟后再使用,否则会影响温育温度的准确性。
洗涤液结晶:浓缩洗涤液在低温下可能会有结晶析出,属于正常现象。使用前可在 37℃ 水浴中加热溶解,再用蒸馏水稀释(通常1:20)。
洗板:洗板必须彻底,防止残留物导致非特异性吸附。手工洗板时,每孔加满洗涤液,静置 1 分钟后甩尽,并在吸水纸上拍干,通常需重复 5 次。
结果计算:建议使用专业的曲线拟合软件(如Curve Expert)或Excel绘制标准曲线,确保计算准确。