补体片段4b(C4b) 是补体系统经典途径和凝集素途径激活过程中,由C4转化酶裂解C4蛋白后产生的大分子片段。它是形成C3转化酶(C4b2a)的关键成分,也是补体激活的重要标志物。
检测原理:通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
利用纯化的抗人C4b抗体预包被在微孔板上,制成固相抗体。
往包被微孔中加入待测样本、标准品和HRP标记的检测抗体。
经过温育和彻底洗涤后,加入底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅与样本中C4b的浓度呈正比。
检测波长:酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度(OD值)。
主要用途:仅供科研使用(如补体激活机制研究、自身免疫病辅助诊断、炎症反应监测等),不得用于临床诊断。
常见规格:96T(96孔)和 48T(48孔)。
保存条件:2-8℃冷藏保存,切勿冷冻,有效期通常为6个月。
核心性能指标.
为了让你更直观地了解该试剂盒的性能,我整理了以下关键参数:
参数项目 详细说明
检测方法 酶联免疫吸附试验(ELISA),双抗体夹心法
灵敏度 极高,最低检测限通常可达 0.5 ng/mL - 2.0 ng/mL
检测范围 通常为 1.56 ng/mL - 100 ng/mL 或 3.125 ng/mL - 100 ng/mL
特异性 识别天然裂解产生的C4b,与完整C4及其他补体成分无明显交叉反应
样本类型 人血清、血浆(EDTA/柠檬酸钠/肝素抗凝)、细胞培养上清、组织匀浆等
重复性 板内、板间变异系数(CV)通常小于 10% - 15%
试剂盒组成成分.
一个标准的试剂盒通常包含以下组分:
酶标包被板:96孔(12孔×8条),已包被抗人C4b抗体。
标准品:冻干品或溶液,用于绘制标准曲线。
酶标试剂:HRP标记的抗人C4b抗体。
样本稀释液:用于稀释样本。
浓缩洗涤液:通常为20×或30×浓缩液,使用时需用蒸馏水稀释。
显色剂A液和B液:底物溶液,需避光保存。
终止液:硫酸溶液。
封板膜:用于温育过程中的密封。
标准操作流程.
平衡与配液:试剂盒从冰箱取出平衡至室温(约30分钟)。按说明书比例稀释浓缩洗涤液。
加样:
设立标准品孔(加入不同浓度标准品)。
设立样本孔(加入待测样本,通常需稀释)。
设立空白孔(只加样本稀释液)。
温育:封板,于 37℃ 恒温箱中温育 30-60分钟。
洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置后甩干,重复3-5次,拍干。
加酶标试剂:每孔加入酶标试剂(空白孔除外),混匀后 37℃ 温育 30-60分钟。
洗板:同上。
显色:每孔加入显色剂A液和B液各50μL,37℃避光孵育10-15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,轻轻震荡混匀。
读数:在450nm波长处测定吸光度(OD值),根据标准曲线计算样本浓度。