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| 销售商： 上海谷研实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品名称：人抗鼠抗体(HAMA)ELISA试剂盒
英文名称：Human antimous antibody, HAMA ELISA
货号：GOY-1300E
规格：96T/48T
用途：仅供科研研究实验
预期用途
英文名称：Human antimous antibody, HAMA ELISA
货号：GOY-1300E
规格：96T/48T
用途：仅供科研研究实验
预期用途
本试剂盒采用酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）原理中的双抗原夹心法，用于定量或半定量检测人血清或血浆样本中的抗鼠免疫球蛋白抗体（Human Anti-Murine Antibodies, HAMA）。HAMA主要产生于接受过鼠源单克隆抗体（如用于诊断显像或肿瘤治疗的抗体药物）治疗的患者体内，其存在可能导致：
后续鼠源抗体治疗无效化或产生过敏反应
免疫检测（尤其是双抗夹心法）出现假阳性或假阴性干扰（Hook效应）
放射性免疫显像（RII）或放射免疫治疗（RIT）时循环加速清除，影响靶向效果和剂量估算
本试剂盒提供可靠的HAMA浓度检测手段，适用于：
评估患者接受鼠源抗体治疗前后的免疫应答状态
研究HAMA对诊断试剂或治疗效果的影响
临床试验样本分析
生物医药研发中的免疫原性评估
检测原理
本试剂盒采用双抗原夹心ELISA法：
包被： 96孔微孔板的孔内预先包被有高纯度的小鼠免疫球蛋白（Ig）或其片段（通常为IgG的Fc段）。
加样与孵育： 将稀释好的待测人血清/血浆样本加入微孔中。若样本中存在HAMA（即抗鼠抗体），则会与包被在孔壁上的鼠Ig结合。
洗涤： 洗去未结合的物质。
加酶标抗原与孵育： 加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的鼠免疫球蛋白（HRP-Mouse Ig）。此酶标鼠Ig会与结合在包被鼠Ig上的HAMA形成“包被鼠Ig - HAMA - HRP-鼠Ig”复合物。
洗涤： 洗去未结合的HRP-鼠Ig。
显色： 加入显色底物液（通常是TMB）。结合在孔内的HRP催化无色的TMB转化为蓝色的产物。
终止反应与比色： 加入终止液（如酸性溶液）终止反应，使蓝色变为黄色。用酶标仪在特定波长（通常450nm，需参考550nm或630nm波长进行校正）下测量各孔的吸光度（OD值）。
定量分析： OD值与样本中HAMA的浓度呈正相关。通过与标准曲线进行对比，即可计算出样本中HAMA的浓度。
试剂盒组分
预包被微孔板： 1块（96孔，可分拆），包被有鼠免疫球蛋白（或片段），板条可拆卸。已用不干胶密封膜密封。
HAMA校准品/标准品： 通常6-7瓶（冻干粉或浓缩液），浓度范围覆盖低、中、高值（如：0, 20, 50, 100, 200, 500 ng/mL）。需按说明书用提供的稀释液复溶或稀释成系列浓度。
样品稀释液： 1瓶（液体），用于稀释血清或血浆样本。
HRP标记的鼠免疫球蛋白（HRP-Mouse Ig）浓缩液： 1瓶（浓缩液，常为100x），需按说明书用提供的酶标抗体稀释液进行稀释（如1：100）。
酶标抗体稀释液： 1瓶（液体），用于稀释HRP-Mouse Ig浓缩液。
洗涤缓冲液浓缩液： 1瓶（20x或25x浓缩液），需用蒸馏水或去离子水按说明书比例（如1：20或1：25）稀释后使用。
TMB显色底物液： A液+B液各1瓶，使用时等体积混合（或预混好提供）。
终止液（Stop Solution）： 1瓶（常为1M或2M硫酸或盐酸溶液）。
封板膜（Plate Sealer）： 数张，用于孵育时覆盖微孔板。
说明书： 1份（即本文件）。
样本收集与处理
样本类型： 人血清或血浆（EDTA，肝素或枸橼酸钠抗凝）。
避免使用溶血、脂血或严重浑浊的样本，否则可能影响结果。
推荐使用新鲜血清/血浆。 避免反复冻融。
血浆样本可能需要更高的离心力去除潜在颗粒物。
采集： 按标准临床静脉采血程序操作。
分离： 血液样本在室温下（18-25°C）凝固30分钟（血清），或采集后立即离心（血浆）。推荐离心条件：2-8°C, 1000 - 2000 × g, 离心10 - 15分钟。
储存：
短期： 分离后的血清/血浆可在2-8°C保存不超过24小时。
长期： 如需长期保存，应将血清/血浆分装于-20°C或更低的-70°C/-80°C冷冻保存，避免反复冻融（建议≤3次）。冻融后应彻底混匀。
每次实验前，将所有冷藏或冷冻的样本恢复至室温并充分混匀。 如有沉淀或絮状物出现，应在离心后取上清检测。
操作步骤
准备试剂：
提前将所有试剂（包括微孔板）置于室温平衡至少30分钟。
根据检测样品数量（待测样本、标准品、空白孔、质控孔），取出所需数量的板条。
按说明书要求稀释标准品、HRP-Mouse Ig浓缩液（在洁净容器中配制工作浓度酶标抗体液）。
按说明书比例用蒸馏水稀释洗涤缓冲液浓缩液（现配现用）。
加样：
设立空白孔（仅加样品稀释液）、标准品孔（加入系列浓度的标准品溶液）、样品孔（加入适当稀释的血清/血浆样本）。稀释倍数（如1：11或1：101）需严格按说明书进行。
每孔建议做双份或三份平行检测以提高精密度。
推荐使用多道移液器提高效率。
小心操作避免产生气泡。
轻轻混匀（勿产生剧烈气泡）。
孵育（抗原-抗体结合）：
用封板膜密封微孔板。
置于37°C恒温箱中孵育 X分钟（说明书会具体指定时间，通常30-60分钟）。
洗涤：
小心揭开封板膜，甩干孔内液体。
每孔加入洗涤缓冲液（已稀释），完全注满孔（~300-350μL）。静置30秒-1分钟。
彻底甩干液体。重复此洗涤步骤共5次（具体次数按说明书）。最后一次洗涤后在干净吸水纸上拍干，确保无液体残留（但勿使孔干燥）。
加酶标抗体（HRP-Mouse Ig）：
每孔加入X μL（通常50-100μL） 工作浓度的酶标抗体溶液。空白孔也需加入。
用新封板膜密封。
置于37°C恒温箱中孵育 Y分钟（说明书指定时间，通常30-60分钟）。
洗涤：
重复步骤4相同的彻底洗涤步骤5次（或说明书指定次数）。拍干。
显色：
按说明书要求配制TMB工作液（如需A/B液混合）。
立即（在配制后5分钟内）每孔加入 Z μL（通常50-100μL） TMB工作液。
用新封板膜或铝箔纸避光密封。
置于室温（18-25°C）或37°C（按说明书）避光条件下显色 M分钟（说明书指定时间，通常10-30分钟，需精确计时）。观察到标准品出现明显的梯度蓝色（高浓度颜色深）。
终止反应：
每孔加入 V μL（通常50μL）终止液。顺序应与加入TMB相同。
轻轻摇晃微孔板确保混合均匀（颜色由蓝色变为黄色）。
立即（30分钟内）进行读数。
比色：
用酶标仪在450nm主波长下测量各孔OD值。为减少孔底不平整或指纹造成的光散射影响，强烈建议使用550nm或630nm作为参比波长进行双波长测定校正。
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