瑞孚迪发布PhenoVue Human IgG抗体内吞检测试剂盒
新品发布 | PhenoVue Human IgG抗体内吞检测试剂盒（Fluor 515）：让抗体内吞“看得见、测得准”
抗体内吞评价要用一次实验回答“抗体有没有被吞进去、进去了多少、最后去了哪儿”。因此，能否准确、高效地评估抗体内吞，是ADC及相关生物药开发中的关键一环。PhenoVue Human IgG Antibody Internalization Kit把pH敏感的抗人IgG Fab探针直接嵌进活细胞成像体系，让同一次实验同时看到“抗体有没有内吞”、“是否进入溶酶体”。
PhenoVue Human IgG Antibody Internalization Kit（Fluor 515，pH sensitive）以PhenoVue Fluor 515 pH敏感Fab抗人IgG抗体为核心，高亲和力结合人IgG抗体的Fc区，对未偶联抗体与ADC同样适用。该Fab探针在胞外中性pH下荧光很弱，随Fab–抗体复合物内吞进入内体、溶酶体等酸性区室后信号显著增强，信噪比高、内吞事件清晰可读。配合PhenoVue 633溶酶体染料与Hoechst 33342核染料，无需洗板即可完成活细胞、长时程的抗体转运监测，且对细胞活力与增殖影响极小。
新品看点：Fluor 515版本带来了什么？
与已有的Fluor 647版本相比，近日发布的Fluor 515版本最核心的变化是更低的pKa（≈5.7，647版约6.5–7）。这意味着探针在中性与弱酸性pH下更暗、只在强酸性区室才明显点亮，背景更低，尤其适合反复时间序列采集与“深部内吞”动力学的刻画；而在低靶标表达、弱内吞信号，或成像系统未针对515检测优化的场景下，远红通道的Fluor 647版本仍是更合适的选择——两个版本同源同流程，可按细胞模型与仪器配置自由选配。
方案优势：一体化试剂盒vs单组分探针
市面上同类pH敏感染料多以单组分形式提供。若要同时判断抗体是否进入溶酶体、是否与溶酶体共定位，还需自行挑选并搭配一支溶酶体染料，再通过一轮轮预实验去摸清染色浓度、孵育时长、通道如何分光、染色顺序会不会相互干扰。这些前置工作既耗时，又难以在不同批次、不同实验之间保持一。
PhenoVue Human IgG Antibody Internalization Kit把这些前置工作一次性打包解决：pH敏感Fab、PhenoVue 633溶酶体染料与Hoechst 33342核染料按已验证的配比与浓度成套提供，染色液如何配制、孵育多久、三色通道如何分离均有标准流程，客户无需自行摸索测试即可直接上机；所有组分在同一质量体系下生产与放行，批次间一致性有保障，也让不同时间、不同批次、不同实验室之间的数据更具可比性。
实验流程：
整个流程无需洗涤：细胞接种并培养至50–70%汇合度后，先加入含Hoechst 33342与633溶酶体染料的染色液1（50µL/孔，37℃孵育1h）；随后换用含待测抗体（推荐60nM）与Fluor 515 pH敏感Fab（180 nM）的染色液2（50µL/孔），保持抗体：Fab摩尔比1:3、使用前室温预平衡30 min，即可上机进行时间序列采集。试剂盒提供2×96 wells与10×96 wells两种规格，前者可满足2×96孔或1×384孔，后者对应10×96孔或5×384孔。
数据展示：
在BT-474细胞（384孔板）中，Trastuzumab（anti-HER2）在1、4、16nM下呈现出清晰的浓度与时间依赖性内吞，48h时信噪比（S/B）分别约为9.7、15.3与16.9；与此同时，每细胞溶酶体斑点数量随时间保持稳定，说明Fluor 515信号的上升来自抗体逐步内吞并向溶酶体转运，而非溶酶体数量的变化。
在0.25–16nM浓度范围内，Trastuzumab与两款ADC（Trastuzumab Emtansine/Kadcyla®、Trastuzumab Deruxtecan/Enhertu®）均给出稳健的浓度依赖曲线。5–72h内，三者的EC50分别稳定在1.48–2.42nM、1.70–2.83nM与1.14–1.91nM，长时间孵育下重复性好，可用于裸抗与ADC内吞效率的定量比较。
从一条通道到一个选择：无论你关注的是常规的抗体/ADC内吞效率，还是长时间序列下的深部内吞动力学，PhenoVue Human IgG Antibody Internalization Kit都能提供免洗、活细胞、可定量的解决方案。新品Fluor 515版本现已上市，欢迎垂询。
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