武汉英科小反刍兽疫酶联免疫快速检测试剂盒开发成功

浏览次数：9177　发布日期：2015-3-17　来源：本站　本站原创，转载请注明出处

武汉英科生物技术有限公司科研人员经过近一年研发，开发出小反刍兽疫酶联免疫快速检测试剂盒，该产品可以应用于检测牛、羊血清中小反刍兽疫病毒抗体，快速、准确、特异性强。

小反刍兽疫（peste des petits ruminants，PPR）俗称羊瘟，又名小反刍兽假性牛瘟（pseudorinderpest）、肺肠炎（pneumoenteritis）、口炎肺肠炎复合症（stomatitis-pneumoenteritis complex），是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病，主要感染小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。

将纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,经克隆培养和间接ELISA方法筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8。生物学特性鉴定试验表明：5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b；5B11单抗腹水的效价达1：819200,3H10-3B8达1：12800；血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性；相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B82株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点；2株杂交瘤细胞的染色体均为99-104。以Bacmid-PPRV-N重组蛋白和用亲和层析纯化的单抗5B11建立了小反刍兽疫病毒C-ELISA抗体检测方法。通过检测已知为PPRV抗体阳性和阴性的血清对该方法进行条件优化,最终确定抗原用碳酸盐缓冲液以1：1000稀释后包被酶标板,于37℃条件下震荡反应,以含0.5%BSA和0.05%Tween-20的PBS作为稀释液,稀释血清至1：10、单抗至0.17ng/孔的终浓度后一起加到酶标板,使单抗与血清中的PPRV抗体竞争结合N抗原特异性表位,检测结果的临界值通过92份已知为PPRV抗体阴性血清的抑制率分布来确定,最终将临界值确定为50,即92份阴性血清的PI均值加上3倍的标准偏差。基于上述研究成果,先后组装了3个批次的试剂盒。

在试剂盒的初步应用中,将自制的试剂盒与国际通用的标准试剂盒(CIRAD-BIOS PPRV rC-ELISA试剂盒)进行比较分析,对自制的PPRV C-ELISA抗体检测试剂盒的使用价值进行了评估。通过对977份临床样品进行检测,结果经统计分析表明：自制的试剂盒与参考试剂盒的符合率为99.38%,说明自制的PPRVC-ELISA抗体检测试剂盒可用于PPR临床检测。

小反刍兽疫ELISA 检测试剂盒 Peste des Petits Ruminants Ab ELISA kit

规格： 96检测/盒

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