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上海雅吉谷氨酰胺(Glutamine)分光比色法试剂盒促销
点击次数:1221 发布日期:2022-7-14  来源:本站 本站原创,转载请注明出处
自今年我公司推出新品:谷氨酰胺(Glutamine)分光法试剂盒,得到广大师生一致好评,为答谢广大师生厚爱,我司决定自7月15日起至年底,凡购买我司谷氨酰胺(Glutamine)分光法试剂盒,均送小米背包礼品一份(经销商除外)。该试剂盒详细说明书如下,您也可以向我司免费索取pdf说明书文档,欢迎广大师生朋友购买,上海雅吉生物科技有限公司助力您的科研,更多试剂盒可以参考官网:www.yajimall.com.

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
谷氨酰胺(Glutamine)是构成人体蛋白质所必需的20种氨基酸之一。是人体内最普遍的、不可缺乏的条件性必需氨基酸,是构成蛋白质不可缺少的氨基酸之一,更是某些细胞培养中最基本的元素。由于谷氨酰胺不稳定的特性,在细胞培养基的整合中,易自发性分解为谷氨酸和氨离子,而氨离子对细胞的毒性很强,因此,在细胞培养体系中,须密切关注谷氨酰胺的储存寿命(SHELF LIFE)和实时监测。

测定原理:
在谷氨酰胺酶(Glutaminase)作用下,谷氨酰胺发生脱氨基反应,产生谷氨酸(glutamic acid)和氨离子;
谷氨酰胺+H2O———————谷氨酸+NH4+
然后用显色剂进行显色,显色后在570nm下进行测定。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制:
试剂一:液体50mL×2瓶,4℃保存;
试剂二:液体1.5ml×1瓶,-20℃保存;
试剂三,粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入10mL蒸馏水,充分混匀溶解,用不完的试剂仍 4℃保存

谷氨酰胺提取:
1、细菌或培养细胞样品:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议1000万细菌或细胞加入2mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.2g组织,加入2mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)或细胞培养液样品:按照血清(浆)或细胞培养液体积(mL):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.2mL血清(浆)或者细胞培养液加入2mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。
2、在有盖EP管中加入下列试剂:
试剂名称(μL) 测定管 对照管1 对照管2
样本 1000 1000  
试剂一     1000
试剂二 10 10ul蒸馏水 10
混匀,37℃水浴30min(盖紧,以防止水分散失),
试剂名称(μL) 测定管 对照管1 对照管2
试剂三 200 200 200
90℃水浴20min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却,于570nm波长处比色,
△A=A测定管-A对照管1 - A对照管2。对照管2只要做一管。

谷氨酰胺含量计算:
1标准条件下测定回归方程为y = 0.0074x-0.5255;x为谷氨酰胺含量(µg/mL),y为吸光值。
2按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算
谷氨酰胺含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2)=1351×(△A+0.5255)
3按照蛋白浓度计算
谷氨酰胺含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr
4按照样本质量计算
谷氨酰胺含量(µg/g鲜重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W
5、按照细菌或细胞密度计算
谷氨酰胺含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)
V1:加入反应体系中样本体积,1mL;V2:加入提取液体积,2 mL;V3:加入血清(浆)或细胞培养液体积,0.2 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1000:细菌或细胞总数,1000万。

注意:
1、该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酰胺含量测定,检测下限为100µg/mL。
2、标准曲线线性范围为:100µg/mL -600µg/mL。
3、ΔA线性范围为:0.01-2;若大于2则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。
相关公司:上海雅吉生物科技有限公司
联系电话:021-34661275
E-mail:yajikit@163.com


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