赛多利斯讲座预告：抗体样品的高通量糖型筛选

下周四下午三点，陈老湿将在线与大家分享Octet及GlyM糖基化试剂盒在抗体样品的高通量糖型筛选中的应用，扫描上图右下角二维码即可报名参与。

究竟如何在细胞株构建阶段就实现高通量的糖型筛选呢？今天我们就先来一睹为快吧！
 

单克隆抗体的糖基化位点和结构[1]

单克隆抗体糖基化修饰多数为 N-连接的聚糖。IgG抗体一般在Fc段的Asn297有一个保守的N糖基化位点。其核心结构是由 3 个甘露糖（Man）和2 个 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）分子组成的复杂“双触角型”五糖分子的结构，并且不同的糖型可含有不同数量的其他分子，如岩藻糖（Fuc）、甘露糖、N-乙酰葡糖胺、半乳糖（Gal）、二等分 N-乙酰葡糖胺和唾液酸（Sia）。这些糖链的长度、分叉的方式、单糖的排列顺序的差异造成了N-聚糖复杂多变的结构。
 

单克隆抗体常见糖型
 

糖型种类及丰度都可能影响蛋白药物的有效性、安全性和质量稳定性。比如唾液酸含量越高，IgG与Fc受体的亲和力越低，从而导致ADCC（抗体依赖性的细胞介导的细胞毒作用）活性降低。融合蛋白中唾液酸含量越高，体内清除速率越慢。高甘露糖型的单抗分子与 C1q 的亲和力较低，其 CDC（补体依赖的细胞毒性作用） 活性也较低。高甘露糖型结构在人体中容易引起免疫原性。因此糖基化被普遍认为是单抗药物的关键质量属性（CQA）之一。
 

上游工艺中的糖型化检测试剂盒
生产工艺中的细胞株、培养基、培养工艺都可能影响单抗产品的糖基化修饰水平。目前蛋白糖型的鉴定主要是LS-MS（液相质谱）的方法，但是这个方法不适合粗样品测试（比如细胞培养上清），通量也很低。为了解决这个痛点，赛多利斯专门开发了基于Octet^®互作仪的糖基化检测试剂盒，可以在早期阶段，比如CLD（细胞株筛选）的时候对糖型水平进行高通量检测。
 

分别用Octet的传感器检测蛋白浓度（比如用Octet^®蛋白A（ProA）生物传感器检测IgG titer），根据浓度把所有样品都调整在某个浓度下，然后用糖型化检测试剂盒检测糖基化水平，并与浓度信息一起分析来选取最佳克隆。

目前，赛多利斯已推出唾液酸（GlyS）检测试剂盒和甘露糖（GlyM）检测试剂盒，原理是将能特异性识别某种糖型的凝集素固化在传感器上，然后与糖基化样品结合，再通过信号放大的方法对糖基化水平进行排序。

下面分别是两种试剂盒能够识别的糖型：
 

甘露糖（GlyM）检测试剂盒：可以识别高甘露糖型，杂合型和双触角复合型N聚糖
 

唾液酸（GlyS）检测试剂盒：主要识别末端为唾液酸的糖基

1. 通量高，测试速度比较快，如果用8通道的仪器检测96个样品，只需要2个小时，而16通道和96通道则分别只需要70分钟和半个小时；
2. 可以直接在粗样品中对糖基化水平进行排序，目前市面上还没有类似产品；
3. 全自动化检测，重复性好；

• 对了，其他糖型试剂盒也正在路上...