CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班邀请函

日期

时间

培训内容

授课老师

1月19日

9:30-20:00

培训报到

刘刚博士

2008年博士毕业于中国科学院上海生命科学研究院，从事肿瘤干细胞，细胞衰老，肿瘤转移等细胞作用网络和通路的研究，并作为骨干研究人员参加了973计划项目、国家自然科学基金重点项目、在香港中文大学做为作为Postdoc和Research fellow，从事研究工作。先后Nature Genetics，cell research、PLOS one等期刊发表论文十余篇。

1月20日

9:00-11:30

理论讲解：

一、基因编辑技术简介

1.ZFN 2.TALEN 3.CRISPR

二、CRISPR/Cas9基因编辑技术

1.guide RNA序列设计

2.靶基因序列查找

3.sgRNA在线设计、特异性分析和效率验证

4.不同物种sgRNA设计

实验操作：

一、CRISPR/Cas9基因表达载体克隆构建

1.sgRNA设计合成

2.敲除载体选择及线性化

3.sgRNA连接，转化等

 

13:00-17:00

理论讲解：

一、CRISPR/Cas9转染策略

1.生物转染 2.物理转染 3.化学转染 4.筛选策略选择

二、脂质体转染，电转，病毒转导，显微注射等）

三、Crispr/Cas9转染策略（植物，动物，原核生物）

四、CRISPR/Cas9病毒系统选择

实验操作：CRISPR/Cas9敲除质粒转染靶细胞

1月21日

9:00-11:30

理论讲解：

一、CRISPR技术应用解析

1.基因敲除2.基因敲入3.CRISPR在转录调控中的应用4.CRISPR靶基因标记定位5.基因敲除小鼠模型构建策略

二、CRISPR案例解析

1.基因敲除小鼠模型构建2.植物基因敲除应用3.细菌，真菌等基因敲除应用

三、Cripr基因脱靶分析及解决方案

四、Crispr/Cas9与siRNA、shRNA

实验操作：

1.CRISPR/Cas9转染后靶DNA检测

2.靶基因修饰位点扩增及鉴定

13:00-17:00

理论讲解：

一、单碱基基因编辑技术

1.HF2-BE2 2.BE3系统 3.ABE系统。

二、CRISPR-Cpf1系统介绍

三、CRISPR-C2c2系统介绍

四、多靶点sgRNA载体构建策略

五、Crispr/Cas9系统在肿瘤和遗传病治疗中应用解析

实验操作：

1.       CRISPR基因敲除效果检测