大多数的细胞计数仪都是基于染料，以台盼蓝为主，其是最主要和应用最广的一种染料，还有一种是荧光染料，以吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）为主。除了基于染料的方法外，还有库尔特细胞计数方法。下面，我们就一一拨开这些技术的面纱：

【台盼蓝染色计数】

台盼蓝是使用最广的细胞活性染料，常用于检测细胞浓度与死活。活细胞有完整的细胞膜，台盼蓝无法进入细胞内部，因此活细胞不会被染色，而死细胞细胞膜破裂，台盼蓝可进入细胞内部并将其染成蓝色。细胞经过台盼蓝处理后，再通过显微镜下观察或采用成像拍照技术，就可以对细胞进行计数和活率分析。目前，根据细胞染色、测试和分析的方式，分为手动、半自动和全自动三类。

手动细胞计数和活率分析

手动计数是传统的计数方法，也是我们细胞工作者历历在目的“练眼力神法”。操作者使用台盼蓝将细胞进行染色处理，孵育1-3分钟后，通过移液器或滴管将其加入血球计数板的计数区，为防止产生气泡，必须一次性充满计数区，然后在显微镜下靠眼力人工数取标准方格中的细胞数和活死细胞数，再根据稀释倍数和所取的样品体积，计算出总的细胞浓度和细胞活率。由于手动计数费时费力，且不同操作者之间的计数重复性误差较大，即使是同一操作者也会出现重复性差的计数结果，使得结果的可靠性和准确性无法保证，因此，现在很多细胞工作者纷纷转向全自动的仪器设备，以获得稳定准确的结果，并真真正正的解放人力。

半自动细胞计数和活率分析

半自动计数是在台盼蓝染色的基础上，采用相机拍照进行分析的方法。其前期样品制备的工作和手动计数方法相同，人工台盼蓝染色、孵育后，通过移液器将细胞样品加入到波片计数板上，再把波片计数板插入到半自动分析仪的检测区，手动调整半自动分析仪上的旋钮，主观选择染色较好且清晰的拍照区域，最多选取3-4个区域进行拍照，再通过软件进行拍照控制和拍照后的数据分析。从过程上来看，半自动计数方法只是把数取细胞和计算浓度与活率设定为自动，其它操作、包括拍照区域的选择都是人工操作，且统计意义较小，因此，从根本上来讲，其并没有解决和实现一致性的计数和活率分析。

全自动细胞计数和活率分析

全自动计数是真正意义上的全自动细胞测试，包括台盼蓝染色、上样、拍照、测试、分析和数据记录，以贝克曼库尔特公司生产的Vi-CELL XR为典型代表。操作者仅需将待测细胞放入样品盘，全自动分析仪Vi-CELL XR便会自动执行台盼蓝染色，并将染色后的细胞样品抽取至流动池，通过视频捕获技术进行相机拍照，可连续拍摄多达100张的图像信息，统计量是其它方法的15-30倍。拍照后，应用全自动的测试分析，采用同一参数分析相同的样品，保证了细胞计数和活率分析更加标准和规范，测试结果也更准确。测试后，各项测试数据自动以word、excel、PDF等多种格式保存，实现了数据记录的准确无差。为了满足GMP和FDA 21 CFR Part 11的要求，所有测试数据均以数据库格式保存，拥有完整的电子记录和电子签名功能。为了监测细胞在不同培养条件下的生长状态，Vi-CELL XR可自动地跟踪培养细胞的各种状态参数，同时根据需要制作细胞生长曲线。为了满足对高通量测试的需求，Vi-CELL XR可连续进行样品的测试，12位的全自动样品盘可连续旋转运行，实现不间断的样品测试，真正实现了无人为干扰，完全无差别的自动化准确分析。

【荧光染色计数】

目前应用荧光染色法进行细胞计数和活率分析是另一种半自动细胞计数法，只不过其采用的染料由台盼蓝更换成了荧光染料，多为碘化丙啶（PI）和吖啶橙（AO）双染料。PI是一种DNA结合性染料，无膜通透性，不能透过活细胞膜，因此只能染死细胞，荧光显微镜下观察为红色荧光。而AO具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色，产生绿色或黄绿色均匀荧光。因此，通过产生的荧光差异，采用拍照技术，便可实现细胞计数和活率的分析。

正如在台盼蓝染色计数中对半自动细胞计数和活率分析的描述，操作者需要对细胞进行荧光染料处理，目前常用的方式有两种，一种是双荧光染料一次性采样装置，使用此采样装置将待测细胞吸入，然后插入到半自动分析仪的检测区，另一种是将荧光染色处理后的细胞用移液器加入到波片计数板上，然后将计数板插入到检测区，再通过手动调整拍照位置进行拍照并进行数据分析。

【库尔特细胞计数】

库尔特计数是采用库尔特原理（又名电阻法）进行细胞计数的方法，细胞通过置于电解液中且内外装有电极的小孔管，置换掉同等体积的电解液，从而引起小孔管内外电极间电阻的变化，形成电压脉冲，脉冲个数反映的是通过小孔管的细胞的个数，脉冲的高度反映的是通过小孔管的细胞的大小，只要有一个细胞通过小孔管，就会形成特定的脉冲，因此，通过记录脉冲个数和高度，便可实现准确的细胞计数和粒度分析。库尔特计数器也是标准的血细胞计数方法，作为细胞计数来说，是行业内最准确的细胞计数器。但鉴于其原理，库尔特计数器并不能直接给出细胞的活率信息，但库尔特计数器的分辨率为纳米级，因此，可以根据活死细胞间的体积差异，在一定程度上间接获知细胞活率信息。