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希尔博士关于外泌体保存的常见问题的解答
点击次数:1445 发布日期:2019-12-5  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

希尔博士在接受外泌体NTA检测的技术咨询时,经常会被问到外泌体保存相关的问题。

譬如:

→我的外泌体已经在4度放了一周,还能做检测吗?

→我是1个月前提取的外泌体,一直放在-80度冰箱,还能做粒径检测吗?

→我的样本放在-80度冰箱两个月了,还能提取外泌体做检测吗?

→我在沈阳,寄样本去上海做检测,可以用冰袋寄送吗?

诸如此类………


目前并没有定论来回答以上问题,

我们应该去文献中寻找可参考的信息,

抑或——最科学的方式——自行做对照实验去探究。

Example 1​
数据来源:Influence of Storage Condition on Exosome Recovery , DOI: 10.1007/s12257-015-0781-x  
实验目的:探究不同温度下长时间保存对外泌体样本的影响
实验方法:对HEK 293的细胞培养上清提取分离外泌体,将外泌体样本分成4组,分别保存在-70℃、-20℃、4℃和室温下10天后,进行Western Blot检测,选择的marker为HSP70、CD63、CD9。
实验结果:结果显示,在-20℃和-70℃下保存的外泌体比较完整无损,而4℃和室温下CD63已基本没有表达,室温保存条件下HSP70的表达量也有所降低。


相较于4℃、-70℃和新鲜样本,室温存放的外泌体蛋白和RNA浓度的降低程度较明显。

本例说明,-20℃或更低温度是比较可取的外泌体长期存储条件。

Example 2
数据来源:Effects of storage temperature on airway exosome integrity for diagnostic and functional analyses ,DOI: 10.1080/20013078.2017.1359478
实验目的:探究不同温度下保存对外泌体样本的影响
实验方法:提取分离小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的外泌体,将外泌体样本分为三组——新鲜提取组和分别保存在-80℃、4℃ 4天的两组,通过DLS、TEM和zeta电位观察外泌体的变化。
实验结果:结果显示,相较于新鲜提取的外泌体样本,低温储存4天的样本粒径有一定程度的增大,电位数值降低,颗粒有团聚倾向;从TEM图片看,-80℃保存的外泌体有多层结构产生。


另外,该实验也通过无标记的LC-MS/MS评估了外泌体蛋白质含量,结果表明低温储存一定时间都会引发蛋白质泄露。所以,不论是从外泌体结构还是蛋白质含量角度出发,最好是在分离后立即进行各项实验。

Example 3​
数据来源:Handling and storage of human body fluids for analysis of extracellular vesicles, DOI: 10.3402/jev.v4.29260
实验目的:探究单次冻融和不同时间、温度储存对血浆EVs的影响
实验方法:血浆在新鲜状态和分别在-20℃、-80℃、-196℃储存6个月和1年后被检测,通过RPS、NTA和FCM观察粒径和浓度的变化。
实验结果:图a-d的RPS和NTA结果说明不同温度下储存6个月和1年对样本浓度和粒径影响不明显,CD235a和CD61的表达量也没有太大差异,只有lactadherin的表达相对于新鲜样本升高了约7倍(图e)。综上说明,该研究中用到的血浆样本在不同温度下(低温)储存,即便长达1年,也能保持一定的稳定性。
同篇文章对唾液和尿液样本也做了类似研究,得到相近结果。


白色:新鲜血浆;灰色:血浆冻存6个月;黑色:血浆冻存1年

也有研究团队对不同储存条件对外泌体中miRNA稳定性做评估:miRNA in Plasma Exosome is Stable under Different Storage Conditions (doi:10.3390/molecules19021568)。

从这几个例子来看,不同时间、温度的保存对不同的外泌体样本影响不一;如果研究方向为外泌体形态特征、蛋白或其他功能性分析,在分离后新鲜使用为最佳。目前主流的建议是提取出外泌体后最好是新鲜使用,或低温短期保存。

而到底低温保存一定时间后是否对外泌体有什么影响,希尔博士认为还是因样本而异,实在纠结的话,还是做对比实验,用实际数据说话!

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来源:上海逍鹏生物科技有限公司
联系电话:021-58785545
E-mail:lisa.jia@xpbiomed.com

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