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KinExA分子与完整细胞相互作用系统在CAR-T细胞治疗中的应用
点击次数:1901 发布日期:2018-12-5 来源:本站
仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
因多种因素的限制,自体CAR-T细胞治疗产品可能在应用于患者前未必能够进行全部项目的检定,所以工艺验证非常重要。工艺研究及验证必须结合工艺的实际情况设定相应的验证参数,CAR-T细胞产品工艺研究在不断发展,到目前为止,业界对何种工艺最好并未达成共识。因此,可以在产品研发过程及早期临床试验阶段开展不同程度的工艺验证研究,工艺验证完成后,应在关键工艺步骤设置关键过程控制参数及标准,以提高CAR-T细胞产品的生产一致性。
CAR-T细胞治疗产品的质量控制研究及检测项目一般应包括:细胞数量及其存活率、细胞表型、CAR阳性率检测、生物学效力检测,无菌检测、支原体、热原/内毒素的检测、CAR-T细胞中病毒载体拷贝数及整合的检测等。如果能够检测CAR-T细胞与抗原分子的亲和力,以及CAR-T细胞上抗体的表达量,无疑会提升CAR-T细胞的质量控制标准。
目前市面上除了KinExA技术外,没有其他特别有效的方式检测完整细胞与分子间的亲和力,更无从判断细胞上分子的表达量。KinExA技术可以检测细胞与分子间的亲和力,并且可以计算细胞上分子的表达量。其检测原理如下图,先将梯度稀释的细胞与恒定浓度的分子共同孵育达到平衡,离心之后收集上清液(此时上清液中只存在游离的分子),再通过已提前包被过的珠子捕获游离的分子,用荧光标签的抗体检测游离分子的量,通过检测器检测得到相应的数值后,利用KinExA系统软件进行数据分析。
下图是国内某知名CAR-T公司通过KinExA技术检测CAR-T细胞与抗原分子间相互作用的结果。
结果表明,CAR-T细胞与抗原的亲和力Kd为45.41pM,T细胞表面CAR的表达水平为1.368e+5,Kd与EL的95%置信区间均较窄,数据非常准确可信
来源:
上海双墨生物科技有限公司
联系电话:021-60277509
E-mail:
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