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外泌体微泡非特异性标志物总结分析
点击次数:758 发布日期:2018-6-11  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

外泌体微泡作为细胞间信号传导的重要媒介,越来越多的研究揭示其作为重大疾病生物标志物的临床价值。当前外泌体微泡快速,高通量,多参数的主流分析方法仍为流式分析法。流式分析法主要依赖散射光或者荧光设定分析阈值,划门分析。然而由于外泌体微泡体积远小于细胞,散射光信号弱,传统流式散射光检测灵敏度低,需借助荧光标记才可分析外泌体微泡。其中,非特异荧光标记为外泌体微泡总量分析较为普遍的方法

近日de Rond等人系统研究适合外泌体微泡非特异标记的理想标志物,详细分析Calcein AM,  Calcein violet,  CFSE,  Di-8-ANEPPS和Lactadherin(另外,因Annexin V和Lactadherin同样结合膜磷脂成分,并且依赖于钙离子,无法适用于血液等样品直接标记,膜磷脂结合效率远低于Lactadherin,故不在此研究范围内)等不同类型标记物。因不同标志物标记外泌体微泡效率明显不同,并且对蛋白质聚集体,脂蛋白,细胞碎片等物质的干扰敏感性不同,其效能比较分析需要非常严格的对比信息方有意义。de Rond等人首次借用Apogee纳米流式超高的散射光灵敏度和分辨率,作为不同标志物标记效能分析的参考标准,结合MCF7细胞上清和血小板外泌体微泡样本,详细比较了上述5种标志物识别外泌体微泡的效能情况。

研究统计发现,Di-8-ANEPPS, Lactadherin和超灵敏散射光可以检测到100% 的EpCAM+ MCF7 外泌体微泡(图1);Lactadherin和超灵敏散射光可分别检测到33%和d 61% 的血小板 CD61+外泌体微泡(图2)。只有在血小板蛋白质杂志去除后,Di-8-ANEPPS才可以特异识别结合外泌体微泡。Calcein AM,  Calcein violet和 CFSE则是检测灵敏度相对较差或极易引起集群检测问题的标志物。因此,截止目前还没有能够同时满足:标记所有外泌体微泡,特异性足够高,与抗体标记兼容,适用生物体液样本直接标记,标记检测时间低于8小时等条件的非特异标志物。 然而,该研究也反映出针对不同外泌体微泡样品,选择合适的荧光标志物,结合Apogee纳米流式超灵敏散射光,仍会是当前外泌体微泡流式分析的最佳选择,快速,精准,可靠。 

 

图1,EpCAM+ MCF7 外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析

 

图2,血小板外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析

 

 

参考文献

 


de Rond, Leonie, et al. "Comparison of Generic Fluorescent Markers for Detection of Extracellular Vesicles by Flow Cytometry." Clinical chemistry 64.4 (2018): 680-689.

 

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