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Pfu DNA聚合酶

     最后更新:2018-5-22
Pfu DNA聚合酶
试剂名称:Pfu DNA聚合酶
英文名称:Pfu DNA polymerase
国产/进口:国产
产地/品牌:广州东盛生物科技有限公司
规格:250U,1000U 
货号:
CAS号:
参考报价:150/190/560
销售商:广州东盛生物科技有限公司
总点击数:1581
本半年点击数:54
产品类别:分子生物学试剂
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  • 性能参数
  • 公司简介

 

货号

规格(U)

价格

P1021

250

150

P1022*

250

190

P1023

1,000

560

P1024*

1,000

640

注:1 所有产品包装中均提供6×上样缓冲液。

  2 *标识制品中附带dNTP混合物

产品组分

P1021

Pfu DNA聚合酶  (5 U/μl )     50μl

10×Pfu Buffer(Mg2+ Plus)   1.25 ml

6×Loading Buffer           1 ml  

 

P1022

Pfu DNA聚合酶  (5 U/μl )        50 μl

10×Pfu Buffer(Mg2+ Plus)       1.25 ml

dNTPs(各2.5 mM)           1 ml

6×Loading Buffer           1 ml 

 

P 1023

Pfu DNA聚合酶  (5 U/μl)           200 μl

10×Pfu Buffer(Mg2+ Plus)         1.25 ml×2

6×Loading Buffer             1 ml

 

P 1024

Pfu DNA聚合酶(5 U/μl )             200 μl

10×Pfu Buffer(Mg2+ Plus)         1.25 ml×2

dNTPs(各2.5 mM)             1 ml×2

6×Loading Buffer             1 ml 

注: 10×Pfu Buffer分为Mg2+ Plus与Mg2+ Free两种包装,可方便选择。如没特别说明提供10×Pfu Buffer(Mg2+ Plus)。Mg2+ Free的10×Pfu Buffer提供25 mM MgCl2

保存条件

-20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。

产品说明

Pfu DNA聚合酶是极端嗜热性细菌Pyrococcus furiosus来源的高度热稳定DNA聚合酶,分子量为90 KD。其保真性是普通Taq DNA聚合酶的10倍左右。扩增片段的长度可达2 kb(简单模板)。延伸速度为0.2-0.4 kb/ min(70~75℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性3’→5’外切酶活性。扩增产物具有平末端。

产品特点

  • 保真性最高:保真性是Taq DNA聚合酶的10倍。
  • 热稳定性好:95℃处理2小时后,酶活性为未经处理酶的95%。
  • PCR产物具有平滑末端,可直接用于平端克隆。

产品用途

  • 高保真性PCR扩增
  • 制备基因克隆或蛋白表达用的PCR产物
  • 平末端PCR克隆
  • 位点特异性突变

活性定义

  一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制

  相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,

扩增活性无明显改变。

10×Pfu Buffer

  100 mM KCl

  200 mM Tris-Cl

  20 mM MgSO4

  100 mM (NH4)2SO4

酶贮存液

  20 mM Tris-HCl

  1 mM DTT

  0.1 mM EDTA

  100 mM KCl

  0.5 % TW 20

  0.5 % NP 40

  50 % Glycerol

应用举例

注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。

以λ DNA为模板,扩增1kb片段。

λ DNA(2.5 ng/μl)         1 μl

引物1(10 μM)             2 μl

引物2 (10 μM)            2 μl

10×PCR Buffer             5 μl

dNTPs(2.5 mM/L)           4 μl

Pfu DNA聚合酶(2.5 U/μl)         1 μl

超纯水                  补足至50 μl

PCR反应条件

95℃          3 min

95℃          30 sec

55~68℃     30 sec    30 Cycles

72℃           2 min

72℃           7 min

注意事项

1  Pfu DNA聚合酶的扩增产物只有平末端,可直接用于平末端连接。

2  dUTP、dITP和含有这些核苷酸的引物不能用于Pfu DNA聚合酶催化的PCR扩增。因为该酶与含有尿嘧啶和次黄嘌呤的DNA模板结合后会中止DNA聚合反应。

3  建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。

4  碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Pfu DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-6

5   模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

    人类基因组DNA       0.1 – 1 μg

    λDNA              0.5 – 5 ng

    质粒DNA          0.1 – 10 ng

    大肠杆菌DNA        10 – 100 ng

Q&A

问:Pfu DNA聚合酶的保真性为何高于Taq DNA聚合酶?

答:这是由于Pfu DNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性,可在扩增的过程中,切掉错配的碱基,降低碱基错配率。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5,而Pfu

DNA聚合酶的碱基错误率仅为1×10-6。Pfu DNA聚合酶主要用于基因筛选、克隆表达、突变检测、定点突变等对保真性有很高要求的实验。其扩增产物只具有

平末端,可直接用于平末端连接。要提高TA克隆效率,建议对PCR产物纯化后,加A再进行TA克隆,加A方法见**页。

问:Pfu DNA聚合酶能扩增多大的片段?

答:对于简单模板,可以扩增2 kb以下的片段。扩增长片段时,能否扩增成功主要与模板与引物的设计有关。为获得良好的扩增结果,建议引物长度大于18 bp,

Tm在55-80℃之间,浓度在0.1-0.5μM之间,略高于Taq。如需要很高的保真性,且又扩增较长片段时,建议选择Fusion pfu DNA聚合酶。

问:Pfu DNA聚合酶的扩增效率为何低于Taq DNA聚合酶?

答:这可能决定于Pfu DNA聚合酶本身的结构与特性。且具有核酸外切酶的活性,容易降解PCR引物。建议在配制PCR反应时,最后加入Pfu DNA聚合酶或使用

PfuMix。

问:使用Pfu DNA聚合酶扩增时,有没有必要在冰上配制PCR反应液?

答:有必要。建议在冰上配制PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性条带背景,获得良好的PCR结果。

 
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广州东盛生物科技有限公司成立于2005年2月,公司专注于研发和生产基础分子生物学试剂。现已经成为国内最大的PCR相关产品、DNA电泳相关产品、DNA纯化相关产品生产厂家之一.自成立之初,东盛就认识到产品质量是企业高速成长的生命线。为此,在每一类产品的生产过程中,逐步建立起有针对性的、标准严格的生产工艺与质控体系,确保产品的规模化生产与质量稳定。同时,根据市场的需求,不断地进行产品改进与新产品研发,紧跟现代生物学研究与应用的前进步伐!经历数年的市场检验,东盛的产品已逐步得到国内广大科技人员的欢迎和认可。在大家的共同努力下,东盛已成长为国内领先的基因克隆与基因分析解决方案供应商。 
2010年3月,东盛生物聘请权威质量认证机构BSI对公司的研发及技术服务体系进行ISO9001:2008认证,使东盛成为国内最早通过一流标准认证的民营生物技术类企业。为客户提供最好的基础分子生物学试剂,协助客户顺利完成科研工作,在生物事业贡献自己力量,一直是东盛生物不懈的追求。
 
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