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PCR Kit
PCR Kit
英文名称:PCR Kit总访问:187
国产/进口:国产半年访问:24
产地/品牌:东盛产品类别:分子生物学试剂
规       格:P3012最后更新:2018-7-31
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参考报价:220
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PCR Kit

货号

规格

价格

P3012

1 ml×5(200次,50 μl体系/次)

220

产品组分

P3012

2×Reaction Mix         1 ml     1支×5

Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl)   160 μl   1支

注:本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存2年。

请勿保存于-70℃,防止反复冻融导致酶活降低。

 

产品说明

   PCR Kit是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需将反应缓冲液与Taq DNA聚合酶按比例混合后,在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9~1.2 kb/ min

(70-75 ℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无3’→5’外切酶活性。

 

产品特点             

  • 使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
  • 快速、高效:减少加样步骤,节约时间。
  • 可重复:降低污染和加样错误风险
  • DNA聚合酶用量灵活可控。

 

产品用途

  • 高通量、高重复性常规PCR检测
  • 制备TA克隆用PCR产物

 

活性定义

    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

 

质量控制

    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,

扩增活性无明显改变。

 

2×Reaction Mix的组分

  100 mM KCl

  20 mM Tris-Cl

  3 mM MgCl2

  0.4 mM dNTPs

  溴酚蓝

  dd H2O

 

酶贮存液

  20 mM Tris-HCl

  1 mM DTT

  0.1 mM EDTA

  100 mM KCl

  0.5 % TW 20

  0.5 % NP 40

  50 % Glycerol

 

应用举例(PCR Taq Mix Kit即PCR Kit)

注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。

 

以λDNA为模板,扩增1kb片段

 λDNA(2.5 ng/μl)                1 μl

 Primer 1(10 μM )               2 μl

 Primer 2(10 μM)                2 μl

 2×Reaction Mix                 25 μl

 Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl)        0.5μl

 dd H2O                     补足至50 μl

 

反应条件

95℃         3 min

95℃        30 sec

55~68℃     30 sec    30 Cycles

72℃         1 min

72℃         5 min

 

备注

1  建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。

2  模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

    人类基因组DNA       0.1 – 1 μg

    λDNA                 0.5 – 5 ng

    质粒DNA             0.1 – 10 ng

    大肠杆菌DNA         10 – 100 ng

3  如进行PCR扩增后,除目的条带外,还伴随其他杂带,建议适当减少体系中的Taq酶用量,以增加PCR扩增反应的特异性。

 

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