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通用RNA提取试剂盒(离心柱型)
通用RNA提取试剂盒(离心柱型)
英文名称:总访问:336
国产/进口:国产半年访问:94
产地/品牌:东盛产品类别:分子生物学试剂
规       格:50次最后更新:2018-11-5
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参考报价:650
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销售商: 广州东盛生物科技有限公司 查看该公司所有产品 >>
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货号

规格

价格

R1051

50次

650

产品组分

组分

R1051(50 次)

溶液 RL

60 ml

溶液 RPI

18 ml

溶液 RW

12 ml

DEPC处理水

10 ml

RNase-free 纯化柱

50 个

RNase-free 离心管

50 个

RNase-free 收集管

50 个

说明书

1 份

需要自备的溶液

●  氯仿

●  无水乙醇

产品说明

通用RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品,提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度,同时通过可在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA,而各种蛋白质和其他杂质均可被去除掉对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力,得到的RNA 纯度更好,质量更高。该试剂盒可从各种细胞或组织中快速提取总RNA,每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×106 细胞,可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应,提取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

产品特点

  • 操作简单,可在一个小时内完成实验
  • 稳定的得率
  • 高纯度产物,可用于多种下游实验

保存条件

2-8℃避光保存9-12个月。

注意事项---------------------------------------------------------------------

  •  严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。
  •  使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下(与组织pH值等相关),如果有DNA污染而又必须去除,则可以用RNase-free的DNase处理样品。
  •   请严格遵照操作步骤操作。
  •   不同起始材料试剂用量及预期RNA产率。
  • RNA浓度=(OD260-OD320)稀释倍数0.04μg/μl

操作步骤---------------------------------------------------------------------

第一次使用前应在溶液 RPI溶液 RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

1. 样品处理

a. 组织:将组织在液氮中磨碎。每 50–100 mg 组织加1 ml 溶液 RL,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液RZ 体积的十分之一。

b. 单层培养细胞:直接在培养板中加入裂解液RZ 裂解细胞,每10 cm2 面积加1 ml溶液 RL。用取样器抽打几次。

注意:溶液 RL 的加入量根据培养瓶面积决定,不是由细胞数决定。如果加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。

c. 细胞悬液:离心取细胞,弃上清。每5–10×106 动物细胞和植物细胞加入1 ml 溶液 RL。加溶液 RL 前不要洗涤细胞,以免降解mRNA。

2. 将匀浆样品在15–30℃放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤: 412,000 rpm (~13,400×g) 离心5分钟,取上清,转入一个新的无RNase 的离心管中。

注意:如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等,可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNARNA存在于上清

溶液中。

4. 加入200 μl 氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15 s,室温放置3 min。

5. 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心10 min,样品会分成三层:黄色的有机相,中间层和无色的水相,RNA 主要在水相中,水相的体积约为所用溶液 RL试剂的60%。把水

相转移到新管中,进行下一步操作。第一次使用前应在溶液 RPI溶液 RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

6. 缓慢加入0.5 倍体积无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,若一次不能将全部溶液和

混合物加入纯化柱,请分两次转入纯化柱中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃掉收集管中的废液。

7. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RPI(使用前请先检查是否已加入乙醇),4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃废液。

8. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RW(使用前请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃废液。

9. 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 RW,室温静置2 分钟,4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,去除残余液体。

10. 将纯化柱入2ml 收集管中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min,去除残余液体。

注意:此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续

RT等实验操作。

11. 将纯化柱转入一个新的离心管中,加30–100 μl RNase-free ddH2O,室温放置2 min,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。

洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。

注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。

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