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植物基因组DNA快速提取试剂盒
植物基因组DNA快速提取试剂盒
英文名称:总访问:235
国产/进口:国产半年访问:12
产地/品牌:东盛产品类别:分子生物学试剂
规       格:50次/100次/200次最后更新:2018-7-31
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CAS   号:
参考报价:485/875/1680
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货号

规格

价格

N1191

50次

485

N1192

100次

875

N1193

200次

1680

产品组分

组分

货号

N1191

N1192

N1193

RNase

 50 μl

100 μl

200 μl

 缓冲液GPL

40 ml

80 ml

160 ml

缓冲液GPD

40 ml

80 ml

160 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

120ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

30mlX2

纯化液TE

5 ml

10 ml

20 ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

 200个

说明书

1份

1份

1份

 

● 漂洗液PE 初次使用前用无水乙醇按1: 3 稀释,即含75%乙醇。

● 客户自备试剂

   无水乙醇

   巯基乙醇 

   氯仿(或酚:氯仿/1 :1)

产品说明

本产品可用于拟南芥、烟草、水稻等植物样本的基因纯化。纯化原理是利用硅胶膜柱可逆吸附体系中的DNA,经漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多纯化液洗脱获得基因组DNA。一次可从不超过100材料中提取到 2-20μg的高纯度基因组OD260/OD280=1.7-1.9),此基因组DNA 可直接酶切等后续实验。

质量控制

纯化的基因组 DNA 质量通过限制性酶切和单拷

保存条件

RNase 保存于-20℃。其他的室温保存

注意事项----------------------------------------------------------------------

● 漂洗液PE 第一次使用前请按瓶上标签加入3 倍体积的无水乙醇,即15ml 漂洗液PE 加入45ml 无水乙醇,30ml 漂洗液PE加入90 ml 无水乙醇,使用后立即盖紧盖子。

● 缓冲液GPL 室温保存可能会有沉淀产生,在56℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA 纯化效率。

● 应尽量使用新鲜的实验材料,确保提取的基因组DNA 不被降解。不能立刻提取基因组DNA  的实验材料应尽快置于液氮或-70℃冰箱中保存并避免反复冻融。

● 使用液氮研磨组织材料时,应随时加入液氮,确保提取的基因组DNA 不被降解。

● 基因组DNA 需长期保存时,建议使用纯化液TE 。用无菌的离心管分装后保存于-20 ℃或-80 ℃。

● 所有离心步骤均为室温下进行。

● 请严格按照操作步骤操作。

操作步骤----------------------------------------------------------------------

1  取植物新鲜组织约100 mg 或干重组织约30 mg,加入液氮充分研磨。

2  将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μl 65℃预热缓冲液GPL 的离心管中(实验前在预热的GPL 中加入巯基乙醇,使其终 浓度为0.1% ),加入1 μl RNase,迅速颠倒混匀后,将离心管放在65℃水浴20 min,水浴过程中颠倒离心管以混匀样品。

3  加入700 μl 氯仿,充分混匀,12,000 rpm  (~13,400 ×g )离心5 min 。

   ● 如果是提取富含多酚或淀粉的植物组织,可在第3 步前,用酚:氯仿/1 :1 进行等体积抽提。

4  小心将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中,加入等体积缓冲液GPD,充分混匀。

5  将混匀的液体转入纯化柱,静置1 min,12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。(吸附柱容积为700 μl 左右,可分次加入离心。)

6  向纯化柱中加入500 μl 去蛋白液PS。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。

7  向纯化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。

8  重复步骤7,向纯化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。

9  离心纯化柱,12,000 rpm 离心2 min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   ● 此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR 或酶切)。同时利于基因组DNA 充分溶解。

10  将纯化柱置于新的1.5 ml 离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加40-100μl 纯化液TE 。室温放置2 min 。12,000 rpm 离心2 min, 管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

  ● 纯化液TE 可用去离子水代替,但其pH 需为8.0-8.5 。

 ● 对纯化液TE 60℃预热,会提高基因组DNA 的产量。

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