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血液基因组DNA提取试剂盒
血液基因组DNA提取试剂盒
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国产/进口:国产半年访问:232
产地/品牌:东盛产品类别:分子生物学试剂
规       格:50次/100次最后更新:2018-7-31
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规格

价格

N1121

50次

440

N1122

100次

785

产品组分

组分

货号

N1121

N1122

红细胞裂解液RS

80 ml

80 ml×2

消化缓冲液DS

15 ml

30 ml

裂解液MS

20 ml

40 ml

蛋白酶K

1 ml

2 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

纯化液TE

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

说明书

1份

1份

注: 裂解液MS中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

  漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年。

如消化缓冲也DS有沉淀,在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

产品说明

本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是首先利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*,细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。

本产品适用于未凝固全血,以及经各种抗凝剂(EDTA、肝素、柠檬酸)处理过的全血样本。一次可从0.4 ml全血中提取到3-10 μg高纯度基因组DNA(OD260/OD280 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

*本产品不能从全血中直接提取DNA,要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA,建议选择Quick血液基因组DNA提取试剂盒(东盛)。

产品特点

  • 高效:一次可获得3-10 μg基因组DNA。
  • 高纯度:无须再纯化即可直接用于下游实验。
  • 安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。

产品用途

  • 常规限制性酶切
  • PCR扩增
  • 文库构建
  • Southern 杂交
  • 分子标记分析

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

血液基因组DNA提取流程图

图1  血液基因组DNA纯化流程图

 

操作方法

1  取血液样本,每400 μl血液加入到一只1.5ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。5,000 rpm离心3min,弃上清,收集白色或淡红色沉淀。

 注:如沉淀仍然呈深红色,表明红细胞裂解不充分,可再加500 μl红细胞裂解液RS处理一次。

 对于哺乳动物全血,每400 μ全血中可提取3-10 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA,因其血液中红细胞有细胞核,血液用量勿超过 20 μl/离心管。每20 μl全血中可提取40 μg的基因组DNA。

2  加入200 μl消化缓冲液DS,旋涡振荡直至完全分散。

    注:如需去除RNA,加入消化缓冲液DS后,再加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液,震荡混匀,室温放置5min。

3  加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS,漩涡振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

注:加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。

4  加入220 μl无水乙醇,上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀,将溶液及絮状沉全部淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

    注:此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5  加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱,以获得高质量基因组DNA。

6  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

7  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

8  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

9   将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2min。

10  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

   注:洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。

   对洗脱液TE 进行60℃预热,会提高基因组DNA的产量。

 

图2  基因组DNA电泳图

 

 

注意事项

1  柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

2  基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

3  基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

基因组DNA的浓度及纯度检测

1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2  DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链

DNA、40 μg/ml 单链DNA。

3  OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用纯化液TE,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低.

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