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DNA凝胶回收试剂盒

     最后更新:2018-5-22
DNA凝胶回收试剂盒
试剂名称:DNA凝胶回收试剂盒
英文名称:
国产/进口:国产
产地/品牌:东盛
规格:50次/100次/200次 
货号:
CAS号:
参考报价:240/440/820
销售商:广州东盛生物科技有限公司
总点击数:859
本半年点击数:538
产品类别:分子生物学试剂
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  • 性能参数
  • 公司简介

货号

规格

价格

N1071

50次

240

N1072

100次

440

N1073

200次

820

产品组分

组分

货号

N1071

N1072

N1073

溶液BD

20ml

40 ml

80 ml

溶液PE

15 ml

15 ml×2

20 ml×3

溶液Eluent

2.5 ml

5ml

10 ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

 200个

说明书

1份

1份

1份

注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

溶液BD中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。

保存条件

室温保存2年。

产品说明

本产品采用了经典的硅胶膜技术,用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段(50 bp-40 kb)。其纯化原理是含有目的片段的琼脂糖凝胶溶解后,硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA片段(高盐、低pH值),蛋白及其它杂质不被吸附而被除去,被吸附的DNA片段在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg高纯度DNA片段,此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

产品特点

  • 回收片段范围广:50 bp-40 kb。
  • 高效:回收率大于85%。
  • 高纯度:OD260/OD280=1.8-2.0。无须再酚/氯仿抽提纯化,可直接使用。
  • 快速:15min完成实验。

产品用途

  • 常规限制性酶切
  • PCR扩增
  • 转化
  • DNA序列测定
  • 体外转录

质量控制

从1 % TAE琼脂糖凝胶中纯化50 bp、1,000 bp、10,000 bp的DNA片段。

DNA凝胶回收流程图

图1  DNA凝胶回收流程图

 

操作方法

1  切取含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶条带。

   注:尽量切除不含有目的DNA部分的凝胶,减少凝胶体积,提高DNA回收率。

   切胶时,请使用长波长UV(360 nm)光盒。且不要将DNA长时间暴露在紫外灯下,以防DNA损伤。

2  称取凝胶的重量近似地确定其体积。

   注:凝胶重量的称量方法:取1.5 ml离心管电子天平称初质量,切胶装在离心管后称终质量,两者差即为胶的质量。不同厂家离心管的重量可能有差异,因此,每个离心管

的重量需单独称量。

3  按照每100 mg琼脂糖凝胶对应100 µl溶液BD的比例,向离心管中加入溶液BD。

4  55℃-65℃水浴7-10min,直至凝胶完全溶化。期间需要振荡混合3次。

   注:琼脂糖必须完全融化,以免堵塞柱子,严重影响DNA片段的回收效率。

    如果总体积大于500 µl,可适当增加溶胶时间。

    若此时溶液变红,可加10 µl 3M NaAC(pH 5.2)。

5  将步骤4所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。

   注:胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在较高温度时结合DNA 的能力较弱。

6  12,000 rpm离心1min。若溶液量大于DNA纯化柱的容积,可分两次离心,弃滤液。

   注:此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

7  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

   注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

   此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,以获得高质量DNA片段。

8  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

9  12,000 rpm离心 3min,以彻底去除纯化柱中的液体。

   注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

10 将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃预热),静置2min。12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA

片段。贮存于-20℃。

   注:溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

   对溶液Eluent 60℃预热,会提高提取DNA目的片段的产量。

图2  切胶回收DNA片段电泳图

说明:使用5μg DL5000进行1%琼脂糖电泳。切出各条DNA片段后,使用本试剂盒逐一回收DNA片段。其结果如图2所示,所获DNA片段纯度高,回收率大于

70%。

 

注意事项

1  电泳时请使用新鲜配制的TAE或TBE电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。

2  本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。如果DNA浓度小,或DNA初始量少,回收率将会偏低。

DNA 浓度及纯度检测

1  回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链

DNA。

2  OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

3  所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12,000 rpm(约13,400×g)。

4 溶液 Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。

 

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广州东盛生物科技有限公司成立于2005年2月,公司专注于研发和生产基础分子生物学试剂。现已经成为国内最大的PCR相关产品、DNA电泳相关产品、DNA纯化相关产品生产厂家之一.自成立之初,东盛就认识到产品质量是企业高速成长的生命线。为此,在每一类产品的生产过程中,逐步建立起有针对性的、标准严格的生产工艺与质控体系,确保产品的规模化生产与质量稳定。同时,根据市场的需求,不断地进行产品改进与新产品研发,紧跟现代生物学研究与应用的前进步伐!经历数年的市场检验,东盛的产品已逐步得到国内广大科技人员的欢迎和认可。在大家的共同努力下,东盛已成长为国内领先的基因克隆与基因分析解决方案供应商。 
2010年3月,东盛生物聘请权威质量认证机构BSI对公司的研发及技术服务体系进行ISO9001:2008认证,使东盛成为国内最早通过一流标准认证的民营生物技术类企业。为客户提供最好的基础分子生物学试剂,协助客户顺利完成科研工作,在生物事业贡献自己力量,一直是东盛生物不懈的追求。
 
售后服务
针对产品使用过程中遇到的问题,提供咨询与解决方案,以及产品试用装申请解答。qq:1648531827
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