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PCR Mix
PCR Mix
英文名称:PCR Mix总访问:1921
国产/进口:国产半年访问:760
产地/品牌:东盛产品类别:分子生物学试剂
规       格:1ml/1ml×5最后更新:2018-11-5
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CAS   号:
参考报价:120/500
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销售商: 广州东盛生物科技有限公司 查看该公司所有产品 >>
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货号

规格

价格

P2011

1 ml(40次,50 μl体系/次)

    120

P2012

1 ml×5(200次,50 μl体系/次)

    500

 

产品组分

P2011

2×PCR Mix            1ml    1支

超纯水              1ml    1支

P2012

2×PCR  Mix               1ml    1支×5

超纯水                1ml    1支×5

注: 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存2年。

请勿保存于-70℃,防止反复冻融导致酶活降低。

产品说明

   PCR Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增

体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/ min(70-75 ℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无3’→5’外切酶活性。

产品特点

  • 使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
  • 快速、高效:减少加样步骤,节约时间。
  • 可重复:降低污染和加样错误风险

产品用途

  • 高通量PCR检测。
  • 高重复性PCR检测。
  • 制备TA克隆用的PCR产物。

活性定义

   一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制

   相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置

一周,扩增活性无明显改变。

2×PCR Mix(前名Taq Mix)的组分

  100 mM KCl

  20 mM Tris-Cl

  3 mM MgCl2

  0.4 mM dNTP混合物

  0.1 U/μlTaq DNA聚合酶

  溴酚蓝等

应用举例

注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。(Taq Mix即PCR Mix)

 

以λDNA为模板,扩增1kb片段。

 λ DNA(2.5 ng/μl)                 1μl

 Primer 1(10μM )                  2μl

 Primer 2(10μM)                   2μl

 2×PCR Mix                      25μl

 dd H2O                        补足至50μl

 

反应条件

95℃           3 min

95℃            30 sec

55~68℃       30 sec    30 Cycles

72℃               1~2 min

72℃            10min

备注:

1  建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。

2  模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

    人类基因组DNA       0.1 μg ---1 μg

    λDNA           0.5 ng---5 ng

    质粒DNA          0.1 ng-10 ng

    大肠杆菌DNA         10 ng-100 ng

 

Q&A

问:PCR Mix的反应体系与普通Taq DNA聚合酶的反应体系有何不同?

答:PCR Mix的反应体系中除Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、Mg2+等常规组分外,还包含适当比例的PCR Enhancer与稳定剂。而且,反应体系中的离子种类与

浓度也有所区别。

问:为什么PCR Mix的灵敏度与扩增效率会高于普通Taq DNA聚合酶?

答:这是由于东盛对PCR Mix反应缓冲液中的成分与浓度进行了优化。我们在TaqMix反应缓冲液中添加了适当比例的PCR Enhancer,提高了聚合酶的热稳定性,

显著降低DNA二级结构对于PCR扩增的影响。同时,对PCR Mix反应缓冲液中的离子浓度与比例进行优化,使得聚合酶处于最适活性状态,从而获得了最佳的扩

增效率。

问:为什么PCR Mix的重复性更好?

答:这是由于PCR Mix是规模化工业生产,PCR体系组分的浓度与比例一致性好,且减少多种溶液被PCR模板污染的可能性,以及在加样过程中人为造成的误

差,大大提高了实验的重复性,特别适合高通量与高重复性PCR检测。

问:PCR Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆?

答:可以直接进行TA克隆。

 

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