PyroMark® Q24焦磷酸序列分析平台
利用焦磷酸测序技术（Pyrosequencing）以24孔板形式进行定量甲基化和突变分析。PyroMark Q24采用成熟的焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术，在遗传分析和表观遗传的甲基化研究中进行基于序列的实时检测和定量。高度准确的结果，用于表观遗传学和癌症研究；可靠的等位基因频率和甲基化程度分析；序列信息有助于发现稀有突变和CpG位点；甲基化分析和SNP分型可以整合在一次实验中完成；可在不到15分钟的时间内分析1-24个样品。该平台包括序列分析仪PyroMark Q24、用于制备单链DNA的PyroMark Q24真空工作站、相关试剂和对照，以及分析用的PyroMark Q24软件。

快速分析表观遗传学甲基化，检测遗传突变与变异
• 在表观遗传学以及癌症研究中获取高度精确的结果
• 基因表达和甲基化的可靠定量分析
• 序列信息可支持发现罕见变异
• 单次检测中结合甲基化分析与SNP分型
• PCR结束后在15分钟内平行分析1-24个样品

原理和流程
焦磷酸测序技术基于测序原理，数分钟内可获得定量数据。PyroMark Q24 是提供real-time 测序信息的完整平台，高度适用于表观遗传学研究和基因检测。该系统包括PyroMark Q24、PyroMark Q24 真空底座、PyroMark Q24 软件、试剂PyroMark Gold Q24 Reagents、对照PyroMark Control Oligo 和PyroMark Q24 Validation Oligo（见表格1）。同时提供样品制备方案，可在PyroMark 24 真空底座上制备单链DNA。
步骤 1
测序引物可与PCR扩增的单链DNA模板杂交，用DNA 聚合酶、ATP 硫酸化酶、 荧光素酶、三磷酸腺苷双磷酸酶等酶以及底物，包括腺苷-5'-磷酸硫酸酐（APS）和荧光素一起孵育（见图"Principle of Pyrosequencing- steps 1 and 2"）。
步骤 2
首先加入的dNTP，与模板链互补的dNTP在DNA聚合酶的催化下结合到DNA链上。每次互补结合都会释放与dNTP摩尔量相当的焦磷酸（PPi）（见图"Principle of Pyrosequencing- steps 1 and 2"）。
步骤 3
存在APS的条件下ATP 硫酸化酶将PPi转化为ATP，ATP可驱动荧光素酶介导的荧光素氧化，发出与ATP量成正比的可见光。 荧光素酶催化反应产生的可见光可用电荷耦合器检测，可在原始数据输出中看到一个峰值（Pyrogram）。每个峰的高度（光信号）与结合的核苷酸量成正比（见图"Principle of Pyrosequencing- steps 3 and 4"）。
步骤 4
三磷酸腺苷双磷酸酶是一种核苷酸降解酶，可连续降解未结合的核苷酸与ATP。降解完成之后，结合另一个核苷酸 （见图"Principle of Pyrosequencing- steps 3 and 4"）。
步骤 5
dNTP是依次添加的，反应时Alfa-硫代三磷酸脱氧腺苷（dATPS）是dATP的替代物，因为DNA聚合酶对dATPS的催化效率比对dATP的催化效率高,且dATPS不是荧光素酶的底物。当反应继续时，形成互补的DNA链，核苷酸序列由Pyrogram的信号峰值确定（见图"Principle of pyrosequencing - step 5"）。
流水线式的流程 — 从样品到结果
多功能PyroMark Q24可与表观遗传学和基因分析流程无缝结合，且与QIAGEN先进的样本制备、亚硫酸氢盐转化和 PCR 扩增技术相兼容。借助于高度可靠的仪器可在测序水平上对CpG位点和突变进行检测和定量分析 。流水线式的流程意味着可更快速地获得结果。
快速方便的样品制备
从PCR产物到单链样品直接用于测序，应用PyroMark Q24 真空底座可在15分钟内同时制备24个样品 ，使用该工作站操作简单，且手动时间少于5分钟。
便于使用的PyroMark Q24 软件
PyroMark Q24软件安装在一台电脑上，可完整分析您的结果。软件包含两种分析模式，CpG 和 AQ（等位基因定量分析）。这两种模式可在同一个板上分析样品，支持同时分析不同类型的样品。AQ 模式可用于分析单个和多元位点以及二、三和四等位基因突变。CpG 模式可用于分析多重连续CpG位点，提供亚硫酸氢盐处理的内参。
应用
多功能PyroMark Q24克与表观遗传学和基因分析流程无缝结合。
高度适用于表观遗传学研究的分析工具
焦磷酸测序与QIAGEN表观遗传学产品线兼容，并且可精确、灵敏地定量分析甲基化状态，提高高度可靠的序列数据（见图"Pyrogram trace illustrating CpG methylation analysis of the MLH1 gene"）。该方法甚至可用于鉴定新的变异，检测DNA低水平的异常甲基化。PyroMark Q24包含分析CpG甲基化的完整软件和亚硫酸氢盐处理的内参。
定量分析单个CpG位点
分析单个CpG位点对于研究各种肿瘤的基因表达是非常重要的（见图"Pyrosequencing analysis of CpG methylation pattern in the RASSF1A gene"）。由于传统方法的数据是低分辨率的，通常灵敏度不高。焦磷酸测序技术克服了这一局限，可高度精确地分析甲基化序列单个位点的变化。
高度适用于基因分析的平台
基因分析包括多种分析基因组DNA差异的应用，包括突变检测和SNP分型。PyroMark Q24 可精确地、高度灵敏地分析靶基因，定量分析混合细胞系的等位基因表达。焦磷酸技术为基因突变分析（如KARS）提供经优化、验证的RUO检测。
KRAS 分析
在多种人类癌症最常见的突变中，编码12、13和61都涉及到KRAS基因的突变。PyroMark Q24 KRAS v2.0 test确保通过单次实验高度可靠地对这些编码的突变进行检测和定量分析。此外，PyroMark Q24可灵活构建稀有突变的分析体系（见图"Results from mutation analysis of codons 12 and 13 using PyroMark KRAS v2.0 test and PyroMark Q24" 和 "Results from mutation analysis of codon 61 using PyroMark Q24 KRAS v2.0 test and PyroMark Q24"）。