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徕卡首创白激光门控技术搭载TCS SP8 X共聚焦显微镜
点击次数:6504 发布日期:2018-3-5  来源:本站 本站原创,转载请注明出处
众所周知,荧光寿命成像需要脉冲式的激光光源。徕卡首创白激光Lightgate门控技术,白激光(WhiteLight Laser)是从470nm到670nm激发谱线自由可调的激光光源,同时又是一个脉冲式的激光光源,其脉冲频率正好适合于常规染料的荧光寿命成像。徕卡HyD混合型检测器具有灵敏度高、背景噪音低、动态范围大、读取速度快等特性。徕卡HyD与白激光整合后,即可实现时间门控(gating)成像,在白激光的两个脉冲激发之间,HyD检测器的时间窗口自由可调,可从时间维度来避开自发荧光、激光反射光和杂散光等信号的干扰。



搭载白激光的徕卡TCS SP8 X 共聚焦显微镜
拥有 Leica TCS SP8 X 可以调节激发光与荧光染料精确匹配,降低使用激光能量,并且提高细胞活性。激发和检测光谱的自由调节使采集复杂的激发-发射光谱成为可能。有了光谱信息,任何染料都可以实现最少光谱交叉、最少样品损害的最佳激发。可同时使用最多8条激发谱线。

 
Lightgate在荧光成像中去除叶绿体自发荧光的影响

为了检测Lightgate在荧光成像中去除叶绿体自发荧光的影响,Kodama Y.使用配备白激光和HyD检测器的Leica TCS SP8 X对M. polymorpha植株中的荧光标记进行了对比鉴定。Lightgate能很好地去除叶绿素在黄色和绿色波段的自发荧光干扰,仅需延后0.1ns即可在绿色波段去除绝大部分自发荧光的串扰。


Lightgate能去除叶绿素在黄色和绿色波段的自发荧光干扰


Lightgate检测起始时间对去除自发荧光程度的影响。仅需延后0.1ns开始门控检测,即可去除绝大部分自发荧光信号。

由于总的检测时间窗口缩小,打开Lightgate时间门控之后,人工标记荧光的亮度会稍微有所下降,但是下降幅度很小。由于使用了高灵敏度的HyD检测器,Lightgate门控导致的亮度下降对正常成像几乎完全没有影响。


打开Lightgate时间门控对在根细胞中Citrine黄色荧光信号的影响

自发荧光的干扰成为植物学成像的一大瓶颈,使得对生理状态下的组织和细胞内的物质追踪等应用变得异常困难。在各种去除自发荧光的各种方法中,徕卡白激光的Lightgate时间门控技术是目前最快捷而有效的一种方法,在去除自发荧光和杂散光的同时,又能保存下绝大部分真实的荧光信号,同时可应用于z-stack、时间序列等各种成像方式中,使得在植株水平进行多色荧光多维成像变得更加轻松自如。

实验材料
本文中图1-图5中使用的拟南芥(Arabidopsis thalinana)材料为绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)定位在线粒体β-ATPase亚基上的43A9株系14天幼苗,材料由中山大学生命科学学院姚楠实验室提供,特此感谢!
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